[发明专利]反转探针及其用于核酸检测的用途

权利要求书

1.将核酸探针从靶核酸序列中分离的方法，所述方法包含步骤：

(a)将核酸探针与怀疑含有所述靶核酸序列的样品在下述条件下组合，如果所述样品中存在所述靶核酸，则所述条件允许所述探针与所述靶核酸序列退火，其中所述核酸探针包含化学基团，所述化学基团被修饰或去除时允许所述核酸探针或其片段形成发夹结构并从所述复合物解离；和

(b)提供能够修饰或去除所述化学基团的试剂，从而如果所述样品中存在复合物，则所述核酸探针或其片段形成发夹结构并从所述复合物解离。

2.权利要求1的方法，其包含检测步骤(b)所产生的、指示所述复合物存在的产物，从而测定所述样品中是否存在所述靶核酸的额外步骤。

3.权利要求1的方法，其中所述发夹结构含有一个茎。

4.权利要求1、2或3任一项的方法，其中在步骤(b)中，所述试剂去除所述化学基团。

5.权利要求1、2或3任一项的方法，其中在步骤(b)中，所述试剂修饰化学基团。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中核酸探针在所述化学基团附近被切割。

7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述核酸探针包含一个被屏蔽的巯基键。

8.权利要求7的方法，其中所述核酸探针包含一个被含二硫键基团屏蔽的巯基键。

9.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述试剂包含与所述靶核酸序列互补的核酸序列。

10.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述试剂与能够与所述靶核酸序列退火的第二核酸序列连接，使得当所述第二核酸序列与所述靶核酸序列退火时，所述试剂修饰或去除所述核酸探针中含有的所述化学基团。

11.权利要求10的方法，其中第二核酸序列与所述靶核酸序列的第一位置退火，所述核酸探针在靶核酸序列的第二位置退火。

12.权利要求11的方法，其中所述第一和第二位置彼此相邻。

13.权利要求1-8中任一项的方法，其中所述试剂包含与所述核酸探针互补的核酸序列。

14.权利要求1-13中任一项的方法，其中所述试剂包含选自以下试剂组的试剂：金属、还原剂、螯合剂、亲核体、亲核化合物、亲电体、亲电化合物、催化肽、催化小分子、蛋白酶、核酶或诱导化学转化的蛋白质。

15.权利要求1-14中任一项的方法，其中所述化学基团选自碱基、经修饰的碱基、寡核苷酸、经修饰的寡核苷酸、核苷酸间键、经修饰的核苷酸间键、保护性基团、肽、蛋白质、多聚体、珠和纳米粒子。

16.权利要求1-15中任一项的方法，其中所述核酸探针还包含可检测的标签。

17.权利要求16的方法，其中步骤(b)中所述化学基团的修饰或去除引起所述可检测的标签产生可检测的信号。

18.权利要求1-17中任一项的方法，其中所述核酸探针或所述靶核酸与一配体偶联。

19.权利要求1-18中任一项的方法，其中所述化学基团是含硫的核苷酸间键。

20.检测样品中靶核酸序列存在与否的方法，所述方法包含步骤：

(a)将能够与所述靶核酸序列退火形成复合物的核酸探针与怀疑含有所述靶核酸序列的样品组合，其中所述核酸探针包含化学基团，所述化学基团被修饰或去除时允许所述核酸探针或其片段形成发夹结构并从所述复合物解离；和

(b)提供能够修饰或去除所述化学基团的试剂，从而如果所述样品中存在复合物，则所述核酸探针或其片段形成发夹结构并从所述复合物解离；和

c)检测步骤(b)所产生的、指示所述复合物存在的产物，从而测定所述样品中是否存在所述靶核酸。

21.权利要求20的方法，其中发夹结构包含茎。

22.权利要求20或21的方法，其中在步骤(b)中，所述试剂去除所述化学基团。

23.权利要求20或21的方法，其中在步骤(b)中，所述试剂修饰所述化学基团。