[发明专利]通过PH操作将污染物与肺炎链球菌多糖分离

权利要求书

1.一种在纯化之前降低复杂细胞肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)溶解产物肉汤中的蛋白质含量且保持其中荚膜多糖含量的方法，所述方法包含以下步骤：

(a)使选定肺炎链球菌(S.pneumoniae)血清型在大豆基培养基中生长，其包括：

(i)向含有所述大豆基培养基的第一个容器接种所述选定血清型的菌种储备物，且培育所述第一个容器直到生长要求得到满足，

(ii)向含有所述大豆基培养基的第二个容器接种来自步骤(i)的培养物，同时在所述第二个容器中维持稳定的pH值和温度，和

(b)用洗涤剂溶解步骤(a)中所产生的细菌细胞，从而产生含有可溶性蛋白质、细胞碎片、核酸和多糖的溶解产物；

(c)搅拌所述细胞溶解产物历时足以确保完全溶解和多糖释放的时间；

(d)将所述细胞溶解产物的pH值降低到小于5.5以使所述洗涤剂和大部分所述可溶性蛋白质沉淀析出；

(e)在不搅拌的情况下将步骤(d)中所形成的溶液和沉淀保持历时足以使所述沉淀沉降的时间；和

(f)通过离心和/或过滤加工所述溶液和沉淀，

由此溶液中的所述荚膜多糖得以保留且所述可溶性蛋白质得以有效减少。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述选定肺炎链球菌血清型为1、4、5、6A、6B、7F或19A。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述洗涤剂为脱氧胆酸钠。

4.根据权利要求1所述的方法，其中将步骤(d)中的所述pH值降低到4.5与小于5.5之间。

5.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(a)中的所述pH值通过氢氧化钠、碳酸钠或其组合的碱馈入维持。

6.一种在纯化之前降低复杂细胞肺炎链球菌溶解产物肉汤中的蛋白质含量且保持其中荚膜多糖含量的方法，所述方法包含以下步骤：

(a)在大豆基培养基中使选定肺炎链球菌血清型从开始容器到生产规模容器以递增体积扩大且在细胞生长期间维持稳定的pH值和温度；

(b)用洗涤剂溶解步骤(a)中所产生的细菌细胞，从而产生含有可溶性蛋白质、细胞碎片、核酸和多糖的溶解产物；

(c)搅拌所述细胞溶解产物历时足以确保完全溶解和多糖释放的时间；

(d)将所述细胞溶解产物的pH值降低到小于5.5以使所述洗涤剂和大部分所述可溶性蛋白质沉淀析出；

(e)在不搅拌的情况下将步骤(d)中所形成的溶液和沉淀保持历时足以使所述沉淀沉降的时间；和

(f)通过离心和/或过滤加工所述溶液和沉淀，由此溶液中的所述荚膜多糖得以保留且所述可溶性蛋白质得以有效减少。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述选定肺炎链球菌血清型为1、4、5、6A、6B、7F或19A。

8.根据权利要求6所述的方法，其中所述洗涤剂为脱氧胆酸钠。

9.根据权利要求6所述的方法，其中将步骤(d)中的所述pH值降低到4.5与小于5.5之间。

10.根据权利要求6所述的方法，其中步骤(a)中的所述pH值通过氢氧化钠、碳酸钠或其组合的碱馈入维持。

11.一种在纯化之前降低复杂细胞肺炎链球菌溶解产物肉汤中的蛋白质含量且保持其中荚膜多糖含量的方法，所述方法包含以下步骤：

(a)使选自由血清型1、4、6A、6B和7F组成的群组的肺炎链球菌血清型在大豆基培养基中从开始容器到生产规模容器以递增体积扩大，且在细胞生长期间维持稳定的pH值和温度，所述pH值用氢氧化钠维持；

(b)用洗涤剂溶解步骤(a)中所产生的细菌细胞，从而产生含有可溶性蛋白质、细胞碎片、核酸和多糖的溶解产物；

(c)搅拌所述细胞溶解产物历时足以确保完全溶解和多糖释放的时间；

(d)将所述细胞溶解产物的pH值降低到小于5.5以使所述洗涤剂和大部分所述可溶性蛋白质沉淀析出；

(e)在不搅拌的情况下将步骤(d)中所形成的溶液和沉淀保持历时足以使所述沉淀沉降的时间；和

(f)通过离心和/或过滤加工所述溶液和沉淀，

由此溶液中的所述荚膜多糖得以保留且所述可溶性蛋白质得以有效减少。