[发明专利]新的微生物酶及其应用

权利要求书

1.包含具有酪氨酸酶活性的区段的蛋白质，其中所述蛋白质包含与SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4中所示氨基酸序列或其酪氨酸酶活性片段具有至少70％同一性的氨基酸序列。

2.权利要求1所述的蛋白质，其可获自木霉属菌种(Trichodermaspp.)。

3.权利要求1所述的蛋白质，在其N-末端上包含信号序列。

4.权利要求1所述的蛋白质，其中该蛋白质为表现出酪氨酸酶活性的成熟蛋白。

5.权利要求1所述的蛋白质，其中该蛋白质由可获自通过使用引物对扩增的木霉属菌种的DNA的多核苷酸编码，所述的引物对具有如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8中所示的序列。

6.上述权利要求中任意一项所述的蛋白质，其中该蛋白质由可获自Trichoderma reesei的多核苷酸编码。

7.权利要求1所述的蛋白质，其中该蛋白质由具有SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中包含的序列的多核苷酸编码。

8.权利要求1所述的蛋白质，其具有SEQ ID NO：3或SEQ ID：4中包含的氨基酸序列。

9.权利要求1所述的蛋白质，其包含如SEQ ID NO：3或SEQ IDNO：4中所示的氨基酸序列的酪氨酸酶活性片段。

10.权利要求1所述的蛋白质，其中该蛋白质由能够与具有如SEQID NO：1或SEQ ID NO：2中所示序列的核酸杂交的多核苷酸编码。

11.权利要求1所述的蛋白质，其中该蛋白质为具有约42.9kDa的分子量，约9的pI，约8-8.5的最佳pH和在碱性或中性pH下具有活性的天然蛋白质。

12.分离的多核苷酸，其编码权利要求1-11中任意一项所述的蛋白质。

13.权利要求12所述的多核苷酸，其具有SEQ ID NO：1或SEQ IDNO：2中包含的序列或能够与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2中包含的序列杂交。

14.表达载体，其包含权利要求12或13所述的多核苷酸。

15.权利要求14所述的表达载体，其中在强启动子，诸如cbh1下插入所述的多核苷酸。

16.包含权利要求14或15所述表达载体的宿主细胞。

17.权利要求16所述的宿主细胞，其为丝绸状真菌或酵母菌种。

18.权利要求17所述的宿主细胞，其为木霉属的菌种，优选Trichoderma reesei。

19.生产权利要求1所述的蛋白质的方法，包括下列步骤：

a)将编码所述蛋白质的多核苷酸插入宿主细胞；

b)使所述的宿主细胞在适合于表达所述蛋白质的条件下生长；和

c)任选地回收和纯化产生的所述蛋白质。

20.权利要求19所述的方法，包括：

a)将编码胞外酪氨酸酶的DNA序列插入宿主细胞，所述的DNA序列可获自通过使用引物对扩增的木霉属菌种的DNA，所述的引物对具有如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8中所示的序列；

b)使所述的宿主细胞在适合于表达的条件下生长；和

c)从生长培养基中回收分泌的蛋白质并且任选纯化它。

21.权利要求19或20所述的方法，其中插入的DNA获自T.reesei。

22.权利要求19-21中任意一项所述的方法，其中所述的宿主细胞为木霉属的菌种，优选T.reesei。

23.生产权利要求1所述的蛋白质的方法，包括下列步骤：将有效增强胞外酪氨酸酶基因表达的启动子插入宿主细胞，使所述启动子可操作地与所述基因连接，使所述宿主细胞在适合于表达所述蛋白质的条件下生长，并且任选地回收和纯化产生的所述蛋白质。

24.通过权利要求19-23中任意一项所述方法获得的蛋白质。