[发明专利]使用双特异性寡核苷酸的方法及所述双特异性寡核苷酸

权利要求书

1.一种使用双特异性寡核苷酸通过模板依赖性延伸反应合成核酸分子的方法，其包括如下步骤：

(a)使双特异性寡核苷酸与模板核酸分子退火，其中，所述双特异性寡核苷酸具有三个部分，其中5′-高T_m特异性部分具有与模板核酸的一个位点基本互补以与其杂交的杂交核苷酸序列，间隔部分包含至少两个通用碱基，且3′-低T_m特异性部分具有与模板核酸的一个位点基本互补以与其杂交的杂交核苷酸序列；5′-高T_m特异性部分的T_m高于3′-低T_m特异性部分的T_m，间隔部分在三个部分中具有最低的T_m；间隔部分在5′-高T_m特异性部分和3′-低T_m特异性部分与模板核酸退火的条件下形成非碱基配对的泡状结构，其中在不会只发生3′-低T_m特异性部分的退火的条件下进行退火；以及

(b)延伸所述双特异性寡核苷酸以合成与模板核酸互补的核酸分子。

2.一种由DNA或核酸混合物选择性扩增目标核酸序列的方法，其包括：使用包括至少一种双特异性寡核苷酸的引物对，通过进行至少两个循环的引物退火、引物延伸和变性来扩增目标核酸；其中，所述双特异性寡核苷酸具有三个部分，其中5′-高T_m特异性部分具有与目标核酸的一个位点基本互补以与其杂交的杂交核苷酸序列，间隔部分包含至少两个通用碱基，且3′-低T_m特异性部分具有与目标核酸的一个位点基本互补以与其杂交的杂交核苷酸序列，5′-高T_m特异性部分的T_m高于3′-低T_m特异性部分的T_m，间隔部分在三个部分中具有最低的T_m；间隔部分在5′-高T_m特异性部分和3′-低T_m特异性部分与目标核酸退火的条件下，形成非碱基配对的泡状结构；其中在不会只发生3′-低T_m特异性部分的退火的条件下进行扩增反应中的退火。

3.一种在同一反应中使用两对或更多对引物同时扩增两个或更多个目标核酸序列的方法，其包括：使用其中引物对的至少一种引物为双特异性寡核苷酸的两个或更多个引物对通过进行至少两个循环的引物退火、引物延伸和变性来扩增目标核苷酸序列，其特征在于，所述双特异性寡核苷酸具有三个部分，其中5′-高T_m特异性部分具有与目标核苷酸序列的一个位点基本互补以与其杂交的杂交核苷酸序列，间隔部分包含至少两个通用碱基，且3′-低T_m特异性部分具有与目标核苷酸序列的一个位点基本互补以与其杂交的杂交核苷酸序列，5′-高T_m特异性部分的T_m高于3′-低T_m特异性部分的T_m，间隔部分在三个部分中具有最低的T_m；间隔部分在5′-高T_m特异性部分和3′-低T_m特异性部分与目标核苷酸退火的条件下形成非碱基配对的泡状结构；其中在不会只发生3′-低T_m特异性部分的退火的条件下进行扩增反应中的退火。