[发明专利]猪繁殖与呼吸综合征病毒的N蛋白突变体

说明书

技术领域

本发明提供了一种经遗传修饰的PRRS病毒及编码它的多核苷酸。本发明还提供了包含所述经遗传修饰的病毒和多核苷酸的疫苗。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)特征为母猪和小猪的流产、死产和其它繁殖问题，以及仔猪的呼吸疾病。其致病原为PRRS病毒--巢状病毒目(Nidovirales)和动脉炎病毒科(Arteriviridae)的成员。1980年代后期，在北美和欧洲几乎同时出现该病毒的两种基因型。PRRS病毒现在几乎遍布所有产猪国，并被认为是影响全球养猪业的经济上最为重要的疾病之一。

目前，对抗PRRS的商业疫苗包括改良的活疫苗和死疫苗(灭活疫苗)。死疫苗由于其不能诱导针对异源PRRS病毒株的强大的免疫作用而受到批评。改良的活疫苗在细胞培养中通过连续传代减毒，直到失去毒性。改良的活疫苗比起死疫苗诱发更为广大的保护，但是会带来大量安全性关注，包括残余的毒性、传播至未接种疫苗的猪以及遗传回复为毒性(genetic reversion to virulence)。由于减毒过程中发生的抗原改变，这类疫苗也可失去一些对抗PRRS病毒地方株的保护能力。因此迫切需要新颖的及改良的活疫苗对抗PRRS来提供保护。

附图概述

图1.(A)图示P129核壳体蛋白中NLS突变的位置和序列。(B)假感染的、P129感染的和P129-GG感染的MARK-145细胞的显微照片。上排显示使用相差显微镜技术的典型斑块，下排显示使用FITC缀合的单克隆抗体SDOW17对感染的病灶的荧光抗体染色。注意：用P129-GG感染细胞的核与核仁内没有核壳体(nucleocapsid)染色。

图2.(A)感染后第0天到第28天各治疗组病毒血症猪的数量(每组7只猪)。(B)感染后第0天到第28天各治疗组猪血清的平均病毒效价。(C)感染后第0天到第28天各治疗组猪血清中的平均ELISA抗体水平(S/P比值)。(D)图2C中所示血清的再滴定，测定前将所有的样品稀释为1∶5以更好的区别高效价样品中的差异。(E)四周的研究期间受感染的猪的平均血清中和效价。

序列概述

SEQ ID NO：1北美PRRSV分离株VR2332的N蛋白残基41-47

SEQ ID NO：2VR2332NoLS区序列

SEQ ID NO：3Lelystad NoLS区序列

SEQ ID NO：4VR2332分离株的NES区

SEQ ID NO：5Lelystad分离株的NES区

SEQ ID NO：6来自P129分离株的N蛋白氨基酸序列

SEQ ID NO：7来自P129分离株的ORF7(编码N蛋白)的核苷酸序列

SEQ ID NO：8引物P SHUTTLE FWD

SEQ ID NO：9引物P-SHUTTLE-REV

SEQ ID NO：10诱变引物KK43/44GG-Fwd

SEQ ID NO：11诱变引物KK43/44GG-REV

SEQ ID NO：12表8的缺失突变体。野生型P129的NLS2区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：13表8的缺失突变体。野生型P129的NLS2区的核苷酸序列。

SEQ ID NO：14表8的缺失突变体。P129-GG的NLS2区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：15表8的缺失突变体。P129-GG的NLS2区的核苷酸序列。

SEQ ID NO：16表8的缺失突变体。P129-d43/44的NLS2区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：17表8的缺失突变体。P129-d43/44的NLS2区的核苷酸序列。

SEQ ID NO：18表8的缺失突变体。P129-d43/44/46的NLS2区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：19表8的缺失突变体。P129-d43/44/46的NLS2区的核苷酸序列。

SEQ ID NO：20表8的缺失突变体。P129-d44/46/47的NLS2区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：21表8的缺失突变体。P129-d44/46/47的NLS2区的核苷酸序列。

SEQ ID NO：22表8的缺失突变体。P129-d46/47/48的NLS2区的氨基酸序列。

SEQ ID NO：23表8的缺失突变体。P129-d46/47/48的NLS2区的核苷酸序列。