[发明专利]猪繁殖与呼吸综合征病毒的N蛋白突变体

权利要求书

1.一种组合物，其包含选自下列的PRRS感染性剂：a.)包含N蛋白的经遗传修饰的PRRS病毒，所述N蛋白在选自NLS-2区、NoLS区和NES区中的至少一个保守区被修饰，使得该保守区消失，且其中经遗传修饰的PRRS病毒已被减毒；b.)感染性RNA分子，其编码a.)所述的经遗传修饰的PRRS病毒；和c.)分离的多核苷酸分子，其包含编码b.)所述的感染性RNA分子的DNA序列。

2.如权利要求1所述的组合物，其被进一步修饰，使得保守的NLS-1区消失，或通过引入非保守性氨基酸取代使保守区消失，或其保守区至少部分缺失。

3.如权利要求1所述的组合物，其中所述保守区为a.)NoLS区、NLS-2区和/或NES区中的任一个或其组合。

4.如权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中所述PRRS病毒选自以下任一或其组合：北美PRRS病毒或欧洲PRRS病毒。

5.如权利要求3所述的组合物，其中所述PRRS病毒为北美PRRS病毒，且其中所述保守区为NLS-2区。

6.如权利要求5所述的组合物，其选自以下的组合物：

其中所述N蛋白的残基42和43为甘氨酸，

其中所述N蛋白的残基42和43为甘氨酸，而残基44为天冬酰胺，

其中所述NLS-2区至少部分缺失，

其中所述N蛋白从43到48残基中至少一个缺失，

其中所述N蛋白的43和44残基均缺失，

其中所述N蛋白的残基43、44和46已缺失，

其中所述N蛋白的残基44、46和47已缺失，和/或

其中所述N蛋白的残基46、47和48已缺失。

7.如权利要求1-6中任一项所述的组合物，其含有额外的核苷酸突变、取代和/或缺失，以使回复的可能性最小化。

8.用于保护猪免受PRRS病毒感染的疫苗，包含如权利要求1-7中任一项的组合物以及兽医学用途可接受的载体，所述组合物的量为能有效产生针对PRRS病毒感染的免疫保护的量。

9.用于保护猪免受PRRS病毒感染的方法，其包括用能够产生针对PRRS病毒感染的免疫保护的有效数量的权利要求8的疫苗免疫动物。

10.包含如权利要求1-9中任一项所述组合物的经转染的宿主细胞。

11.用于制备经遗传修饰和减毒的PRRS病毒的方法，该方法包括：a.)突变编码感染性RNA分子的DNA序列，以产生包含N蛋白的经遗传修饰的PRRS病毒，所述感染性RNA分子编码PRRS病毒，所述N蛋白在选自NLS-2区、NoLS区和NES区的至少一个保守区被修饰，使得该保守区消失；b.)向能够支持PRRS复制的宿主细胞中引入经遗传修饰的PRRS病毒。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述经遗传修饰的PRRS病毒被一个或多个额外的核苷酸突变、取代和/或缺失进一步修饰，所述突变、取代和/或缺失使回复的可能性最小化。

13.如权利要求11所述的方法，其中所述经遗传修饰的PRRS病毒为北美PRRS病毒或欧洲PRRS病毒。

14.如权利要求11-13中任一项所述的方法，其中所述能够支持PRRS复制的宿主细胞为MARC-145细胞。

15.如权利要求11-13中任一项所述的方法，其中所述能够支持PRRS复制的宿主细胞包含在活猪体内。