[发明专利]具有茎环和无CpG基序的侧翼序列的CpG－ODN(寡聚脱氧核苷酸)用于治疗皮肤病

说明书

发明描述

本发明涉及用于预防和/或治疗上皮组织的美容或药物制剂，该制 剂中含有的核酸包含了适合于形成茎环二级结构的序列；以及涉及使 用这些包含了适合于形成茎环二级结构的序列的核酸来预防和/或治疗 上皮组织，以及含有这些其中包含了适合于形成茎环二级结构的序列 的核酸的织物柔软剂、手工手工清洗组合物、身体和头发护理组合物、 染发剂或手工洗碗组合物。

皮肤器官的炎症是流传甚广的疾病，可以通过内源或外源途径触 发。为了进行治疗，在大多数情况下基于类固醇的疗法是通过局部或 全身性给药来进行的。除了它们的疗效之外，这类物质还表现出了一 系列不希望有的副作用(例如皮肤萎缩、库欣综合症(Cushing’s syndrome))。因此需要可替代的原理来治疗皮肤炎症。

一种这样的可替代的治疗原理是使用具有抗炎症效应的核酸。

关于DNA的免疫刺激活性的历史背景可以追溯到19世纪。1893 年，纽约的外科医生William Coley报道了通过在肿瘤内注射细菌裂解 物(链球菌裂解物，后来被称为“Coley毒素”)在肉瘤病人中诱导了 肿瘤的消退。Coley的历史性发现——即通过模仿细菌感染可以增强特 定的抗肿瘤免疫反应——的重要意义，直到100年后当细菌裂解物的 抗肿瘤效应的机制被定性后才被意识到。

自从20世纪60年代以来，出现了“外源”DNA的免疫刺激效应 的其它迹象。诱导γ-干扰素的产生、激活自然杀伤细胞、以及通过卡介 苗(BCG)的组分诱导的抗肿瘤活性都已经被描述。该卡介苗组分的 免疫刺激活性可以通过与DNA酶预保温来破坏，但不能通过与RNA 酶预保温来破坏。这暗示结论是细菌的DNA造成了BCG组分的免疫 刺激活性。对免疫活性DNA序列的精确研究表明它们是由具有CpG 基序的中心回文序列构成的寡聚核苷酸。

进一步的研究支持了这样的假说，即对于免疫刺激效应来说重要 的基序包含位于中央的CpG组(胞苷和鸟苷形成的二核苷酸)，在其 侧翼为5’末端是两个嘌呤，在3’末端是两个嘧啶。具有共有序列 5’-A/GA/GCGC/TC/T-3’的DNA序列被称为CpG。CpG二核苷酸在真 核DNA中受到抑制。

这些基序在真核DNA中出现的频率只有预期频率的四分之一，并 且在大多数情况下甲基化发生在胞嘧啶。与此相反，在细菌DNA中 CpG基序被发现是未甲基化的，并且具有预期的频率(1∶16)。甲基化 被显示破坏了CpG基序的刺激潜力。细菌和真核DNA之间的这些区 别使得有可能以一种有用的方式对与具有CpG基序的细菌DNA和合 成的寡聚核苷酸(ODN)(CpG-ODN)的免疫刺激效应有关的生物学 观察进行解释。显然，对CpG基序的识别是脊椎动物免疫系统的保留 的防御机制的一部分，以便保护自身免受微生物病原体的侵入。含有 CpG的DNA被先天性免疫系统的细胞识别为病原体存在的分子模式， 并作为危险信号启动了适合于与微生物感染作战的免疫反应。含有 CpG基序的合成的寡聚核苷酸(CpG-ODN)模拟了细菌DNA，可以在 体外和体内增强免疫反应。

对“外源”DNA的识别和随后的免疫反应是先天性免疫系统区分 “自身”和“外源”的一种方式，而不必依赖适应性免疫系统的介导 或干涉。因此，CpG基序属于所谓的PAMPs(与病原体相关的分子模 式)。

CpG基序被TLR-9(toll样受体-9)所识别。TLR-9是toll样受体 家族的成员，这些受体用作模式识别以检测微生物的感染。这些受体 可以识别各种微生物例如细菌、真菌、原生动物或病毒的保留的分子 结构。到目前为止，已经鉴定了该受体家族的十一个成员，同时在多 数情况下它们相应的配体也已经知道。因此，例如TLR4识别细菌脂多 糖、TLR3识别双链RNA、TLR7/8识别单链RNA基序，另外正如已 经描述的那样，TLR9识别CpG基序。