[发明专利]羟基红花黄色素A及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及从中药红花中提取的羟基红花黄色素A，及其制备方法和应用。

背景技术

红花为菊科植物红花属红花(Carthamus tinctorius L.)的干燥花，性味辛温，入心、肝经，具祛瘀止痛功效，是多种活血化瘀方剂的君药。对红花中有效成分的提取越来越引起有关人士的关注，以往研究表明：红花活血的有效成分主要集中在水溶性的红花黄色素。红花黄色素为查耳酮类化合物，具有扩张冠脉、抗氧化、保护心肌、降血压、免疫抑制和脑保护等多种药理学功效。近年来研究证实红花的有效成分主要集中在水溶性的黄色素部分，初步分析表明，红花黄色素是三种水溶性成份的混合物：羟基红花黄色素A(Hydroxysafflor yellow-A)、红花黄色素B、红花黄色素C。研究表明水溶性的红花黄色素中羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow-A)的含量最高，且是红花药理功效的最有效水溶性部位，它的结构式为：

文献【臧宝霞、金鸣、司南等，羟基红花黄色素A对血小板活化因子的拮抗作用[J]。药学学报，2002，37(9)：696】显示，羟基红花黄色素A通过拮抗血小板活化因子的作用抑制血小板的聚集。中国专利[申请公开CN1422616，发明名称：羟基红花黄色素A在制备治疗、预防心脑血管疾病方面的药物用途和申请公开CN1640392，发明名称：大剂量的羟基红花黄色素A或其可药用盐在缺血引起的急性脑中风的药物中的应用]明确了羟基红花黄色素A对缺血性脑中风具有预防和治疗作用。

目前已有关于羟基红花黄色素A的制备方法，CN1422616和CN1640392均公开了采用水提醇沉的提取方法，与大孔吸附树脂柱层析法和聚酰胺吸附法组合，获得羟基红花黄色素A。由于红花经过水提取后，提取液中虽然黄色素含量较大，同时水溶性的多糖、蛋白质等干扰物质也大量出现，由于红花黄色素的水溶性较好，若采用醇沉的方式，即易将黄色素和杂质一起沉淀出来，黄色素损失较大。而且，由于采用聚酰胺吸附法，虽然效果较好，但是在实际应用中受到聚酰胺质量不稳定的影响较大，预处理周期长且复杂，应用难度较大，不易应用于大规模的工业生产中。

CN1475272采用“提取-分离-醇沉-纯化-再纯化-除菌冷冻干燥”工艺制备，将水提取液柱层析分离后再醇沉然后再柱层析纯化，保证了羟基红花黄色素A的纯度，其含量高达90％以上，但其收率很低，仅仅高于1％，不到2％。如此小的收率不利于工业大规模化生产，无实际应用价值。

可见，目前尚无基于收率较高的羟基红花黄色素A的制备方法，而同时又能保证所制备的羟基红花黄色素A的纯度较高。本发明人在对红花提取液进行分离纯化的过程中惊奇地发现，当红花提取液不经醇沉，直接将水提取液进行两步柱层析，并按照不同的柱床径高比将层析柱装成不同的高度时，对羟基红花黄色素A的收率影响很大。本发明人通过多次试验，选定了能保证羟基红花黄色素A收率高的柱床径高比范围，此外本发明人应用Molisch反应和茚三酮反应来监测层析分离过程以保证羟基红花黄色素A的纯度，从而完成了本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种纯度高的羟基红花黄色素A，该羟基红花黄色素A用下述方法制备：

1)提取：取红花药材，加12倍量水80℃下提取3次，每次1.5小时，合并提取液，浓缩至60℃下相对密度为1.10-1.14，静置24小时后离心分取上清液；

2)分离：取上清液柱层析，上清液体积与柱床体积之比为1∶8-12，柱床径高比为1∶7-13，用水以18-22ml/min的流速洗脱至洗脱液Molisch反应及茚三酮反应呈阴性，再用5个柱床体积的5％乙醇溶液以18-22ml/min的流速洗脱，收集5％乙醇洗脱溶液，浓缩至50℃下相对密度为1.2，得浓缩液A；

3)纯化：取浓缩液A柱层析，浓缩液体积与柱床体积之比为1∶18-22的量，柱床径高比为1∶9-15，用水以8-12ml/min的流速洗脱，收集黄色素色带，浓缩至50℃下相对密度为1.2，得浓缩液B；

4)再纯化：取浓缩液B按步骤3)所述工艺，以水为洗脱液反复纯化3次，得浓缩液C；

5)除菌、喷雾干燥：将浓缩液C用垂融玻璃G5初滤后，再采用0.2μm微孔滤膜滤过除菌，然后立即喷雾干燥，出口温度80℃，得羟基红花黄色素A干粉。

本发明的另一目的在于提供一种纯度高收率高且工艺简化的羟基红花黄色素A的制备方法，该方法包括如下步骤：