[发明专利]一种针对人OPN基因用于肿瘤基因治疗的短的干扰核糖核酸

权利要求书

1.一种针对人OPN基因用于肿瘤基因治疗的短的干扰核糖核酸(shortinterfering RNA，siRNA)。制备方法包括如下步骤：

A.从genebank中调取human OPN基因序列；

B.利用GeneChem软件预测有效的siRNA位点；

C.合成12个针对OPN基因的siRNA；

D.12个siRNA转染293T细胞；

E.RT-PCR检测这些siRNA对OPN基因的mRNA的抑制作用；

F.Western检测这些siRNA对OPN基因的蛋白表达水平的抑制作用；

G.筛选mRNA水平和蛋白质水平抑制作用超过90％的siRNA。

H.该siRNA是本权利要求书要求的专利材料。

I.对该siRNA进行LNA化学修饰，增加其稳定性。

J.将该siRNA构建入病毒载体，进行细胞学和动物水平实验研究。

2.根据权利要求1所述的用于肿瘤基因治疗的siRNA(针对human OPN基因)，

其特征在于：所述的用于肿瘤基因治疗的siRNA(针对human OPN基因)是化学合成的RNA干扰制品，针对OPN基因。

3.根据权利要求1所述的用于肿瘤基因治疗的siRNA(针对human OPN基因)，

其特征在于：其序列为：

5’GCAGCTTTACAACAAATACCC3’

5’TCTCCTTGCGCCACAGAAT3’

5’GGACAGTTATGAAACGAGT3’

5’GCATTCCGATGTGATTGAT3’

5’CCATTCTGATGAATCTGAT3’

5’GCCTTATATCGTGATCTGC3’

5’GATGCCAACGATTCCTCCT3’

5’CTCTTCGGGATTGTTTCCA3’

5’ACACCTGAAATTTCGTATT3’

5’Tcaggccagttgcagccttct3’

5’GTTGTCCAGCAATTAATAA3’

5’GCATCTTCTGAGGTCAATTA3’

4.siRNA结构为：

sense     5’pNNNNNNNNNNNNNNNNNNNTT3’

antisense3’TTNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNp5’

5.根据权利要求1所述的用于肿瘤基因治疗的siRNA(针对human OPN基因)，

其特征在于：所述siRNA在mRNA水平的抑制效率大于90％。

6.根据权利要求1所述的用于肿瘤基因治疗的siRNA(针对human OPN基因)，

其特征在于：所述siRNA在蛋白质水平的抑制效率大于90％。

7.根据权利要求1所述的用于肿瘤基因治疗的siRNA(针对human OPN基因)，

其特征在于：所述siRNA对肿瘤细胞的生长有明显抑制作用。