[发明专利]水溶性聚合物修饰的G－CSF偶联物

说明书

技术领域

本发明涉及一类全新结构、通式为(I)的经水溶性聚合物修饰的G-CSF偶联物或其药学上可接受的盐，和其制备方法，和含通式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。

水溶性聚合物-连接基团-N端-G’

(I)

背景技术

粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是由单核细胞及成纤维细胞产生，可刺激粒细胞集落形成，对中性粒细胞有刺激作用。G-CSF与靶细胞膜受体结合，主要刺激粒细胞系造血，亦可使多功能造血干细胞进入细胞周期，促进髓系造血组细胞的增殖、分化和成熟，并驱使中性粒细胞释放至血流，使外周中性粒细胞数量增加，并提高其功能，如吞噬功能，针对肿瘤细胞的抗体依赖细胞细胞毒活性等[Metcalf，Blood 67：257(1986)；Yan et.al，Blood 84(3)：795-799(1994)；Bensinger，et.al，Blood 81(11)：3158-3163(1993)；Neben，et.al，Blood 81(7)：1960-1967(1993)]，因此重组的粒细胞集落刺激因子常用于接受放射治疗或化疗的癌症病人以及骨髓移植后白血病患者的辅助治疗。

市场常使用的人源G-CSF为Neupogen和Neutrogin，以及人源G-CSF的衍生物Neu-wp，G-CSF的衍生物或变体蛋白也有大量文献报道[如US5581476、US5214132、US5362853、US4904584]，这些变体蛋白含多个氨基酸的取代，以求寻找更稳定、活性更高、更适用于临床的G-CSF。

市售的重组人源G-CSF由于其在人体内生物利用度差、半衰期短以及容易被体内蛋白酶破坏，因此需要频繁注射给药，难取得良好的临床治疗效果。研究表明，具有治疗应用作用的蛋白质经聚乙二醇修饰形成聚乙二醇-蛋白质偶联物后，其成为药物的可能性大大提高。这一类聚乙二醇修饰的蛋白质已经在临床上得到了充分的应用[如Katre，Advanced Drug Delivery Systems，10：91(1993)；Inada，et.al，J.Bioact and Compatible Polymers，5：343(1990)]。经过聚乙二醇修饰得到的蛋白偶联物具有更好的物理、化学稳定性，同时还具有更好的蛋白酶介稳定性；另外由于偶联物分子量的增加，其在体内的半衰期得到了延长，在体内形成抗体的可能性亦有所下降，再加上其分布体积减少，这样可使毒性减少。由聚乙二醇修饰的G-CSF或G-CSF变体蛋白已公开在许多文献中，如EP0335423，EP0401384，US5824778，US5985265，WO0044785，WO2001051510，US5824784等。具体而言，在专利US5985265公开的聚乙二醇修饰的G-CSF偶联物中，以修饰在G-CSF的N末端所得偶联物的体外、体内生物活性最好，但用酰化反应进行聚乙二醇修饰氨基选择性差，故通常得到的是一组聚乙二醇修饰在各个位置的混合物，需要进行分离提纯才能得到各个单体，收率低，难于工业化生产；在专利US5824784中用大分子的聚乙二醇醛直接来修饰G-CSF，通过严格控制反应的PH，有选择性的修饰G-CSF的N末端，可以得到相对专一的N末端聚乙二醇修饰的偶联物，但是不可否认，这种反应的选择性是通过边链氨基和N末端氨基的Pka不同而实现的，这在制备生产和质量控制上是有相当难度的；另外，由于大分子醛各批之间醛的含量不一，难以控制大分子醛与蛋白的投料比例，必然影响反应收率和生产成本，同时由于大分子醛与不同氨基偶联产生的偶联物生物活性有差别也会影响到最终产品质量的均一性和活性。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一类全新结构、通式为(I)的、经水溶性聚合物修饰的G-CSF偶联物或其药学上可接受的盐；本发明的另一目的在于提供制备通式为(I)的偶联物或其药学上可接受的盐的方法；本发明的又一目的在于提供含该类偶联物或其药学上可接受的盐的药物组合物及其用途。

本发明涉及通式为(I)的偶联物或其药学上可接受的盐。

水溶性聚合物-连接基团-N端-G’

(I)

其中，水溶性聚合物包括聚乙二醇、聚丙二醇、聚乳酸、聚合氨基酸等，优选聚乙二醇，聚乙二醇的分子量选自2KD-100KD，优选5KD-40KD；聚乙二醇可以是直线型或分支型的；

连接基团由水溶性聚合物末端的功能团与引入蛋白质G′的N末端的功能团发生专一反应而形成；