[发明专利]抗体组及质谱检测变异或修饰生物标志群的试剂盒和方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种新的生物样品中蛋白质分析方法，一种通过能与抗体结合的基质去捕获生物标志，并用有定量控制的质谱分析来检测生物标志。在此提及的此项发明涉及疾病检测领域，为一种新的非侵入性的体外检测方法。更确切地讲，此发明涉及到生物标志(biomarkers)，而这些抗原或生物标志能被以更高的特异性和灵敏度的抗体组及定量控制的质谱将多种疾病一次性区分出来。本发明可以应用到已经脱离人体的体液中的生物标志组合的检测方法或试剂盒开发。

背景技术

随着人类基因组计划的实施和完成，科学家们提出了后基因组(post-genome)计划的概念，研究要点转移到功能基因组学上，而生物功能主要体现物质是蛋白质。1994年，澳大利亚Macquarie大学的Wilkins和Williams首先提出蛋白质组(proteome)的概念，指的是“一种基因组所表达的全部蛋白质”，即包括一种细胞乃至一种生物所表达的全部蛋白质。对于蛋白质组的研究是功能基因组学研究的核心，称为蛋白质组学(proteomics)。蛋白质组学被认为是后基因组研究中最主要的部分。与基因组相比，蛋白质组的组成更复杂，功能更活跃，应用前景更广泛。蛋白质组学从细胞整体水平进行蛋白质属性的研究，如表达水平、翻译后修饰及相互作用等，并由此获得对于疾病过程、细胞生理生化特征和调控网络的广泛完整的认识。所以，蛋白质组学技术正在逐步成为生物学、医学及制药学等的重要研究手段。

不论是细胞的正常功能还是病理特性都在一定程度上取决于细胞所表达的蛋白质功能。因此，鉴定人体内表达的蛋白质的区别，可用于体外疾病样本诊断及筛查，并最终用于药物开发和疾病治疗。而要进行蛋白质表达和功能的差异化分析，要求能够达到分辨细胞内分子的复杂混合物的程度。但细胞内许多物质往往以微量存在，目前用于分析蛋白的方法在上述各方面都有局限，用这些常规手段难以进行化学结构及蛋白质序列鉴定分析。用抗体及质谱联合可克服这一技术缺点。

本发明用抗体组及质谱联合可同时检测出多种(三种以上)的生物标志的方法。如，血库筛查要求特异性地检测出常见病毒微生物疾病的已知标记。但是，制备特异性结合标记并且能在复杂的混合物中鉴别出标记的试剂需要大量时间，这阻碍了此类体外诊断试剂盒方法的发展。目前，还没有一种方法能够将四种以上疾病标志物同时检出。ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)试剂盒等利用抗体可以用于检测一种疾病标志物。利用抗体及三色免疫荧光，最多可以做到检测三种疾病标志物，但三种以上疾病标志物就无法同时检测。利用抗体组与质谱仪联合应用，即可以解决同时鉴别三种以上的病毒或微生物抗原标志物。举例讲，将抗HBV(HBsAg)抗体，抗HCV抗体，抗HIV p24 antigen(Ribas SG et al.Performance of a quantitative human immunodeficiency virus typel p24ant igen assay on various HIV-1 subtypes for the follow-up of humanimmunodeficiency type 1seropositive individuals.J Virol Methods 2003；113：29-34)及抗梅毒抗体(anti-treponemal 17kDa protein)(George R et al.An analysis ofthe value of some antigen-antibody interactions used as diagnostic indicators ina treponemal Western blot(TWB) test for syphilis.J Clin Lab Immunol 1998；50：27-44)等抗体联合标记至Protein A或G的支持物(磁性珠子、芯片等)上。由于每种特异体抗体捕获生物抗原的分子量是不同的，故Protein A/G-抗体与质谱仪联合应用时，质谱仪就非常容易地将这四种抗原同时分开了。由此推理，如果同时选择四种以上的抗体，而这四种以上抗体所结合的抗原分子量是不同的，则本发明可同时区分四种以上不同种类的疾病。本发明可以检测窗口期的献血者，这比单纯的ELISA抗体试剂盒更安全(Lau DT，et al.A rapid immunochromatographic assay for hepatitis B virus screening.J ViralHepat 2003；10：331-334)。