[发明专利]抗体组及质谱检测变异或修饰生物标志群的试剂盒和方法

权利要求书

1.一种用含有抗体组的基质去捕获生物样品中生物标志的分析方法，其特征是采用质谱法对样品中已被抗体组捕获的生物标志进行精确地鉴别、检测的方法。该方法通过以下步骤实现：

(1)样品处理及质谱标准化质控血清制备；

(2)基质与多种抗体结合试剂盒制备、样品上样；

(3)洗涤；

(4)质谱的定量控制及质谱测试；

其中所述步骤(1)将生物样品稀释在稀释缓冲溶液中。用O型血，男女相等，混合制备质谱的标准化质控血清；所述步骤(2)将质谱的标准化质控血清及样品点样在有支持物的基质中的一个位点上。支持物可用金属片、玻璃片、陶瓷片、陶瓷珠、磁性珠、多聚体、液相色谱柱子或Sepharose beads等。基质是任何能与抗体选择性或特异性结合的物质；所述步骤(3)用结合缓冲液洗涤。在样品完全干燥前将第一份洗涤溶液加到该位点。洗涤溶液在位点上至少停留10秒。彻底清除第一份洗涤溶液，用第二份洗涤液重复以上步骤。用水彻底洗涤整个阵列点，自然干燥基质及滞留的生物标志；或用三氟乙酸彻底洗涤整个阵列点(当用陶瓷珠、磁性珠、多聚体、液相色谱柱子或Sepharose beads为支持物时)，将生物标志洗脱至质谱专用金属片或位点上。所述步骤(4)加0.5μL吸能分子(以50％乙腈，0.5％三氟乙酸的制备的饱和标准溶液)用质谱仪去分析滞留与各位点的生物标志或用电喷雾电离已洗脱的生物标志后用质谱仪去分析。用计算机分析数据。定量性质谱调控：每次测试前，用质谱的标准化质控血清，将标准化质控血清中用于定量的标准峰4091.1Da或6634.0Da强度调至50％信号强度的最大值。

2.权利要求1所述的基质是用于捕获多种抗体的，抗体是用于捕获已知的生物标志。所述的生物标志的分析方法，可以检测多个的、变异的或修饰的生物标志群。

3.权利要求1所述的生物标志的分析方法，所捕获的生物标志群来源于已经脱离人体或动物体的生物样品-血液，体液，分泌物，细胞溶解液，组织溶解物和器官溶解物。

4.用权利要求1的方法分析生物样品中特异的生物标志以检测正常与疾病生物标志的方法。

5.用权利要求2的方法，可以同时检测出三种以上疾病的生物标志及一种或多种氨基酸变异或甲基化等修饰的生物标志的方法。

6.权利要求1中基质是任何能与抗体结合的物质：用蛋白A和G标记的基质，用carboxylate-groups标记的磁性珠上基质，用streptavidin标记的基质，或用MEPHyperCel标记的陶瓷珠上基质等。

7.权利要求1中基质的支持物可以是金属片、玻璃片、陶瓷片、陶瓷珠、磁性珠、多聚体、液相色谱柱子或Sepharose beads。

8.一种权利要求1所述的生物标志的用途，其特征在于，用于制备检测变异或修饰生物标志的试剂盒。

9.一种权利要求8所述的检测变异或修饰生物标志的试剂盒，其特征在于，它包括：一容器以及装于容器中的权利要求8所述的检测变异或修饰生物标志的抗体及抗体组。

10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征于，所述的抗体(组)为单克隆抗体(组)或多克隆抗体(组)。