[发明专利]一种微生物固定化包埋颗粒的制备方法

权利要求书

1.一种微生物固定化包埋颗粒的制备方法，其特征在于：按照重量5-20％的比例将培养12～14h的种子液与凝胶液混匀，在25-40℃和pH自然条件下，通过直径为1-4.00mm的制粒器，按照20～30滴/min的流滴速度制得固定化颗粒，颗粒经10～18h化学交联，然后在固定剂中静置加固23～58h，最后以无菌水浸泡24-72h，冲洗净残留药液后，增殖培养，备用；

凝胶液质量百分配比为：海藻酸钠(Na·Alg)2～3％，(150目)活性炭、红砖粉、泥炭土和/或粉煤灰0.3～0.6％，余量为水。

2.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：

凝胶液配制过程为：以所需自来水重量的20％浸润Na·Alg凝胶剂12～20h，100-110℃高温加热，完全溶解后冷却到35～45℃，再向凝胶液中添加定量辅助载体，定容，使用前于110℃下湿热灭菌30min，冷却到35～45℃，备用。

3.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述交联剂质量百分配比为：2～4％CaCl₂溶液，pH值自然或2～4％CaCl₂～饱和硼酸溶液，pH值自然；

加固剂质量百分配比为：a.壳聚糖1.0％水溶液，先用浓HCl溶解后再加水定容，pH自然；b.0.6mol/L乙二胺水溶液，pH自然；或c.4％PVA水溶液，pH自然。

4.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：增殖培养过程为，将制备的固定化颗粒再无菌条件下按照20～25％的质量浓度加入增殖培养基中，控制温度在28～30℃，摇床转速130rpm～150rpm，培养时间24h，之后更换培养基，共3次培养，备用。

5.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于：细菌的菌体培养基为：

基础培养基：牛肉膏0.3％，蛋白胨1.0％，NaCl0.5％，1.5～2.0％琼脂，pH7.0～7.2；

种子培养基：葡萄糖1.25％，牛肉膏0.25％，NH₄NO₃0.1％，MgSO₄ 7H₂O0.02％，KCl 0.02％，pH7.0～7.2；

增殖培养基：葡萄糖4.0％，酵母膏0.3％，KH₂PO₄0.05％，MgSO₄ 7H₂O0.025％，(NH₄)₂HPO₄ 0.2％，pH7.0～7.2。