[发明专利]一种美拉诺坦－Ⅱ的固相合成工艺

说明书

技术领域：

本发明涉及一种美拉诺坦-II的合成工艺，特别涉及一种美拉诺坦-II固相合成工艺。

背景技术：

美拉诺坦(Melanotan)是一种能保护皮肤的人工合成的多肽，是天然alpha-MSH的复本，这种物质最早是在十几年前，由亚利桑那州大学健康科学中心细胞学和解剖学教授Mac Hadlly发现的。Hadly通过临床实验证明，Melanotan能使人的皮肤变黑，但并不影响头发，皮肤学教授Dr.NormanLevine通过研究，也得到同样结论。

尽管人工合成的Melanotan和天然的alpha-MSH结构相似，但是Melanton的有效作用却是天然alpha-MSH的1000倍，并且能更稳定，更持久地保持在人体内，更重要的是在没有日晒和UV射线的情况下Melanotan能刺激黑细胞产生黑色素，因为黑色素是防止日晒和有害的UV射线破坏皮肤细胞和DNA而导致皮肤疾病和皮肤癌的重要物质。美国亚利桑那州癌症中心研究者表明，合成的Melanotan能使皮肤变黑。经FDA批准，研究者将Melanotan II注射到男性志愿者身上，实验证明：Melanotan I和Menlanotan II注射到人体后，不通过日晒和其它UV光线，也能使皮肤变黑；除此之外，还惊奇地发现Melanotan II对治愈性功能衰竭有很大作用。研究人员报导：他们在早期试验中发现一种脑内产生激素的人工合成品可以帮助勃起障碍的男士维持勃起的时间。在实验中，有10位男士注射了这种名为Melanotan II的药物。这10位男性均患有继发性勃起障碍，引起勃起障碍的原因包括糖尿病、心脏病、外伤和高血压。参考International Journalof Impotence Research(2000)12，Suppl 4，S74-S79.基于以上的发现，近年来Melanotan II及其类似多肽一直是科研的热点。

Melanotan II(MT-II)，中文名美拉诺坦-II，的结构如式1所示，是一条侧链环的七肽，

式1

对于有侧链酰胺健成环的多肽一般通常采用在树脂上进行成环的方法，参考(1998)Synthesis of cyclic alpha-MSH peptides.Lett Pept Sci 5：205-208，也有在液相中进行成环的。在树脂上进行成环合成比较方便，通常在Fmoc/tBu固相多肽合成中采用Fmoc-Asp(ODmab)-OH，Fmoc-Lys(ivDde)-OH，他们的侧链保护基团可以用2％肼DMF溶液很方便的去除。另一组保护是用Fmoc-Asp(OAll)-OH，Fmoc-Lys(Aloc)-OH，通过Pd(0)，冰醋酸，N-甲基吗啡啉，氯仿去除。但上述的第一种方法原料难以合成，成本非常高，而第二种方法脱保护试剂非常的贵。在这里我们发明了一组原料比较容易得到，制备成本低并且脱保护也非常简单的保护组合来合成Melanotan II。

发明内容：

本发明的目的是提供一种美拉诺坦-II的固相合成工艺。解决现有成环多肽原料难以合成或去保护条件苛刻的问题，本发明的任务是：选择一组保护基团组合，使其满足：(1)在多肽合成中具有稳定性；(2)原料比较容易制备；(3)同时，所选用的保护基团可以在比较温和的条件切除。本发明的技术方案为：一种美拉诺坦-II的固相合成工艺，其合成工艺步骤如下：以Fmoc-LinkerAmide AM Resin为起始树脂，通过Fmoc/tBu固相多肽合成的方法将Fmoc保护的氨基酸逐个连上，其中Asp用的是Fmoc-Asp(OMe)-OH，Lys用的是Fmoc-Lys(Tfa)-OH，其它氨基酸分别为Fmoc-Nle-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-D-Phe-OH，Fmoc-Trp(Boc)-OH，Fmoc-Hi s(Trt)-OH，最后脱掉Fmoc，用乙酸酐与吡啶进行乙酰化，然后用NaOH的水与有机溶剂的混合液去掉Asp上的甲酯以及Lys上的三氟乙酰基团，通过缩合剂在树脂上直接成环，最后用三氟醋酸∶水∶苯甲硫醚∶二硫乙醇的混合溶液将肽从树脂上切下，得到的粗品，经制备型HPLC纯化，转醋酸盐后，冷冻干燥得到醋酸美拉诺坦-II。

本发明中一些常用的缩写具有以下含义：

Fmoc：芴甲氧羰基

tfa：三氟乙酰基

HOBt：1-羟基苯骈三唑

Phe：苯丙氨酸

Asp：天冬氨酸

Trp：色氨酸

Nle：正亮氨酸

Lys：赖氨酸

Arg：精氨酸

His：组氨酸