[发明专利]抗HER2/ErbB2抗原的单克隆抗体及其制备方法和药物组合物

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种抗HER2/ErbB2抗原的单克隆抗体。此外，本发明还涉及该单克隆抗体的制备方法以及含有该单克隆抗体的药物组合物。

背景技术

乳腺癌是妇女常见的恶性肿瘤，在欧美国家的发病率占女性恶性肿瘤的首位。近20年来乳腺癌的发病率有明显上升趋势。在美国，自1960年以来，乳腺癌的发病率和死亡率分别增长了10.6％和7.6％。我国虽然属乳腺癌相对低发地区，但发病率正逐年上升。据2000年发表的11个市县调查资料表明，乳腺癌的发病率在妇女恶性肿瘤中已由1959年的第2位跃居于第1位，上海的粗发病率为10万分之35。环境因素对乳腺癌发病的影响超过遗传因素的影响，可以预见，在今后一段时间内，随着越来越多的农村妇女走进城市，而城市女性受到更多西方文化的影响，我国城乡妇女乳腺癌的发生率还会进一步上升。

原癌基因HER2/ErbB2编码的蛋白质是一种酪氨酸激酶受体，HER2/HER2同二聚体化以及HER2/HER3和HER2/HER4异二聚体化是HER2发挥生物活性所必需，在肿瘤细胞增生、存活和对抗药物治疗方面发挥重要作用。乳腺、卵巢、肺、胃、前列腺等十余种癌症中均显示部分患者有过量表达的HER2/ErbB2蛋白，尤其对于乳腺癌、卵巢癌，HER2/ErbB2已被国际公认是一个重要的临床指标。目前认为约有30％的原发性乳腺癌患者具有HER2/ErbB2高表达。具有HER2/ErbB2高表达的乳腺癌多数分化差、癌细胞倍增速度快、侵袭性强，内分泌治疗依赖性差，患者肿瘤恶性程度高，对TAM(三苯氧胺，Tamoxifen)及非蒽环类药物如CMF方案(CTX、MTX、5-Fu)耐药，治愈率低，易发生转移及术后复发，因此HeR-2/cerbB-2可作为乳腺癌化疗和内分泌治疗重要反应的预示指标及基因治疗的靶点。1986年，美国的Mark.I.Greene教授最早发现，针对鼠HER2/ErbB2的单克隆抗体对高表达HER2/ErbB2的人乳腺癌细胞及移植入小鼠的肿瘤有明显的抑制作用。随后，美国Genentech公司在鼠HER2/ErbB2单抗4D5的基础上，采用重组DNA技术研制出了命名为Herceptin的人源化单克隆抗体，并于1998年底通过了美国食品和药品监督管理局(FDA)的批准上市，该抗体选择性地作用于肿瘤表面的HER2/ErbB2，能显著下调HER2/ErbB2的表达，此作用可逆转细胞的恶性表型，抑制癌细胞的生长并解决因HER2/ErbB2高表达而造成的化疗耐药现象。在临床使用中，Herceptin与化疗药物结合使用时，不但显著地抑制了高表达HER2/ErbB2乳腺癌组织的生长，而且能使肿瘤发生逆转，由癌细胞变回正常细胞，且副作用远远小于传统化疗，用于治疗晚期乳腺癌患者能显著提高病人的生存期。

综上所述，本领域需要生物活性更高的抗HER2/ErbB2的单克隆抗体，若能再筛选多个具有这种功能且活性又高的单克隆抗体，可以提高临床试验的成功率，对提高此类抗体抗肿瘤的临床效应是一件极有意义的工作。

发明内容

本发明要解决的技术问题之一是提供一种特异性结合HER2/ErbB2的鼠源性单克隆抗体，及其嵌合抗体、人源性抗体和重组抗体，其对HER2/ErbB2抗原表达阳性的乳腺癌和卵巢癌有明显的抑制作用。

本发明要解决的技术问题之二是提供一种上述抗体的制备方法。

本发明要解决的技术问题之三是提供一种含有上述任何一种抗体的药物组合物。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种特异性结合HER2/ErbB2的鼠源性单克隆抗体，它包含重链可变区和轻链可变区，所述的抗体重链可变区具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列；所述的轻链可变区具有SEQ IDNo.2所示的氨基酸序列。

本发明另外提供了建立在鼠源性单克隆抗体可变区基因序列基础上的鼠/人嵌合抗体的全长氨基酸序列，所述重链全长氨基酸序列如SEQ IDNo.3所示；轻链全长氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。其中抗体与其抗原结合单元经过各种修饰(如PEG修饰等)，包括氨基酸残基的取代和氨基酸表面基团的修饰以改善药物特性为目的，如延长半衰期和降低免疫原性。

本发明第三方面提供了一种人源性抗体，将上述鼠源性单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区基因进行人源化改造，包括框架区和抗原结合区域/互补决定区的氨基酸置换。其中抗体与其抗原结合单元经过氨基酸表面基团的修饰以改善药物特性为目的，如延长半衰期和降低免疫原性。