[发明专利]紫叶酢浆草组培方法中的生根培养基及其组培方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种紫叶酢浆草组培方法中使用的生根培养基及利用该生根培养基进行组培的方法。 

背景技术

紫叶酢浆草(Oxalistriangu laris)是酢浆草科植物，为多年生草本，其植株全身为玫瑰紫色，尤以叶片颜色最鲜艳，极具观赏价值。同时，一年中春、夏、秋三季还有粉红色小花，在园林绿化中可作为紫色地被植物，也可作为盆花摆放于花坛或置于室内，用途广泛。虽然园林绿化及市场都需要大批量的紫叶酢浆草，但是紫叶酢浆草因其花败育而无种子，所以给这一优良花卉的大面积繁殖带来困难。 

《紫叶酢浆草鳞茎离体培养及快速繁殖研究》(云南农业大学学报，第19卷第4期，2004年8月)公开了一种采用紫叶酢浆草鳞茎作外植体源，进行离体培养及快速繁殖的方法。但是，该方法中存在的主要问题在于：由于使用的生根培养基为1/2MS+NAA 2.5mg/l+IBA 1.0mg/l，其中NAA的浓度过高，致使出现畸形根，移栽成活率低；同时，IBA的浓度过高，也会造成畸形根影响移栽成活率。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种紫叶酢浆草组培方法中使用的生根培养基，该生根培养基可以避免形成畸形根，移栽成活率高，植株生长健壮，株型美观。 

本发明进一步提供一种利用上述生根培养基进行组培的方法。 

本发明紫叶酢浆草组培方法中的生根培养基包含：1/2MS基本培养基+NAA 0.2-2.0mg/l+IBA 0.2-0.8mg/l。其中，NAA的浓度优选为0.2-1.5mg/l；IBA的浓度优选为0.2-0.5mg/l。 

本发明的紫叶酢浆草的组培方法包括以下步骤：接种、诱导培养、继代培养、生根培养和试管苗移栽，在所述生根培养步骤中使用前述的生根培养基。 

在本发明的组培方法中： 

接种步骤选用紫叶酢浆草的幼嫩叶片作为外植体。 

诱导培养步骤中的诱导培养基包含MS基本培养基+6-BA 0.1-3.0mg/l+NAA 0.1-1.5mg/l。 

继代培养步骤中的分化培养基包含MS基本培养基+6-BA 0.2-1.0mg/l+NAA 0.2-1.0mg/l。在接种外植体5周后，进行继代培养，当继代培养时间达到7-8周时，进行第二次继代培养。 

生根培养的方法是，将丛生小苗中高度在3cm以上的小苗，用灭菌剪刀紧贴愈伤组织表面齐根剪下，分别插入前述生根培养基中，插进培养基的深度在0.5-1cm。 

试管苗移栽的方法是，将根在试管苗基部直接长出的生根试管苗进行移栽，移栽基质中蛭石与草炭土的比例为1∶1-1∶9。 

在移栽的当天，要在移栽好的试管苗上方加罩塑料膜，24小时后，适当在每天上午打开塑料膜2小时，并逐渐增加打开塑料膜的时间，在移栽5天后，彻底去除塑料膜，放置在阳光不暴晒的地方，如果气温低于18℃，夜晚还应继续罩上塑料膜，防止冻伤，当小苗长出新叶，叶片的颜色由绿色、浅粉色逐渐转为紫红色时，就可以放置在正常的阳光温室中。 

在本发明的组培方法中，各培养基的pH＝5.8-7.0，为了适应空间搭载的需要，优选6.8-7.0。 

在本发明的组培方法中，各培养基的MS基本培养基中含琼脂4-12g/l。其中，通常情况下，优选4-8g/l；为了适应空间搭载的需要，适应长时间太空飞行，优选8-12g/l。琼脂可以是国产琼脂或进口琼脂，优选纯度大于75.5％，更优选纯度大于99％的植物凝胶，更优选为Phytagel。

本发明组培方法的详细方案如下： 

培养基分为：诱导培养基--诱导叶片产生愈伤组织；分化培养基--促进愈伤组织分化成小苗；生根培养基--促进完整的试管苗植株生根。 

诱导培养基：MS基本培养基+6-BA(六苄基嘌呤)0.1-3.0mg/l+NAA(萘乙酸)0.1-1.5mg/l； 

分化培养基：MS基本培养基+6-BA(六苄基嘌呤)0.2-1.0mg/l+NAA(萘乙酸)0.2-1.0mg/l； 

生根培养基：1/2MS基本培养基+NAA(萘乙酸)0.2-2.0mg/l+IBA(吲哚丁酸)0.2-0.8mg/l。