[发明专利]巴替非班及其类似物的合成与制备工艺

说明书

技术领域

本发明属于生物化学领域，尤其是涉及肽合成领域。具体来说，本发明涉及巴替非班及其类似物的合成与纯化工艺。

背景技术

冠心病是西方国家的第一死亡原因。在美国，每年约有125万人发病。虽然在我国发病率为美国的30-35％，但冠心病总数已达每年约150-200万人，且呈不断上升趋势，心脑血管疾病死亡人数已占总死亡人数的1/3。冠心病患者即使进行成形或搭桥手术后，血小板凝集引起的再梗塞几率依然很高，同样需要药物治疗。大量研究表明，治疗冠心病最理想的药物是能直接阻断血小板糖蛋白受体IIb/IIIa与配体的结合。

巴替非班的化学名为N²-(3-mercapto-1-oxopropyl)-L-arginylglycyl-L-α-aspartyl-L-α-trypotophyl-L-α-prolyl-L-α-cysteinamide，cyclic(1→6)-disulfide，其中文化学名为N²-(3-巯基-1-氧代丙基)-L-精氨酰甘氨酰-L-α-天冬氨酰基-L-α-色氨酰基-L-α-脯氨酰基-L-α-半胱酰胺-环(1→6)-二硫。本发明所合成的巴替非班及其类似物能特异性地与血小板糖蛋白受体IIb/IIIa结合，阻抑该受体与纤维蛋白原的结合，因此可用于治疗血小板凝集有关的疾病。可以预计，巴替非班及其相关化合物在治疗学上将得到更广泛的应用，因此，需要能够大量合成该类肽的技术。

尽管已有肽合成技术(参见例如Will iams等，1997，Chemical Approaches to theSynthesis of Peptides and Proteins；Rinkiker等，1993，Tetrahedron49：9307-9320；Wang等，1977，J.Org.Chem.42：1286-1290；Kiso等，1995，Peptides Synthesis，Structuresand Applications。)，但是目前还没有可用于大规模、经济地合成与纯化肽(如，巴替非班及其类似物)的技术，尤其是环化线性肽需要用到激烈条件，不方便产业化生产。为此，本发明提供一系列适宜规模化、经济地合成与纯化巴替非班及其类似物的方法，其中尤其避免了使用激烈条件环化线性肽。

发明内容

本发明的第一个方面提供了一种化学合成如下式所示的巴替非班(即化合物I)及其类似物(即化合物II和化合物III)的液相合成方法，

其包括以下步骤：

(a)液相合成带有侧链保护基的线性肽Mpr-X-Gly-Asp-Trp-Pro-Cys-NH₂，其中X为Arg，Lys或Har；

(b)将步骤(a)所得的带有侧链保护基的线性肽脱去侧链保护基；

(c)环化步骤(b)所得的脱去侧链保护基的线性肽。

优选本发明第一个方面的合成方法中的步骤(c)包括：对步骤(b)所得的脱去侧链保护基的线性肽用I₂和H₂O在0-30℃进行环化反应10-40分钟。优选步骤(c)包括：将该脱去侧链保护基的线性肽先溶于水中，向其中加入I₂，用碘溶液在0-30℃进行氧化环化反应，反应时间为10-40分钟，生成环肽。在步骤(c)完成后，即线性肽环化成巴替非班(即化合物I)或其类似物(即化合物II和化合物III)后，优选还可进一步包括纯化过程。例如，通过层析进行纯化，优选通过HPLC进行纯化，然后冻干，得到纯度>98％的精制肽。