[发明专利]一种禽用三联灭活疫苗及制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及家禽类生物制药技术领域，一种禽用三联灭活疫苗及制备方法

背景技术：

鸡减蛋综合症，简称EDS-76是一种腺病毒引起的传染性疾病，可使鸡群产蛋率下降30％～50％，蛋壳破损率达40％以上；新城疫俗称鸡瘟，是由鸡新城疫病毒引起的一种高度接触性传染病，主要经呼吸道和消化道感染，各种年龄的鸡均可感染，以雏鸡最为严重发病率和死亡率可达80％以上；鸡传染性支气管炎的病原为冠状病毒属传染性支气管炎病毒，本病只感染鸡，各种日龄及品种鸡都可发病，40日龄以内的鸡多发，尤以雏鸡发病严重，本病一年四季都可发生，但冬季为甚，鸡群过密，天气突变，通风不良，维生素及矿物质缺乏，饲料供应不足，均可促使本病发生；鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症，有人将该病列为给养鸡业带来巨大经济损失的三大主要病毒性传染病。

联苗是指不同种微生物或其代谢产物组成的疫苗，联苗可简化接种程序，减少接种动物应激反应的次数，此外对于产蛋鸡，尤其是种鸡应尽可能避免或减少在产蛋期间做免疫接种，而鸡新城疫、传染性支气管炎二联灭活疫苗主要是在开产前使用，使用剂量与单苗相当，但其效力与单苗相同，具有使用简便、接种程序简单等优点，减少疫苗的免疫次数，避免家禽产生不必要的应激，达到事半功倍的效果，联苗复配最关键的是抗原最佳配比问题。

一般情况下，菌苗中细菌抗原浓度的提高，可在培养过程中注意，也可通过浓缩的方法。常用的浓缩方法有离心沉淀法、氢氧化铝吸附沉淀法和羧甲基纤维沉淀法，可使菌液浓缩1倍以上。

一般情况下，灭活是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力及致病性，但应尽可能地不影响或少影响其免疫原性。灭活的方法包括物理方法和化学方法。物理法如加热、射线照射等方法，化学法是用化学灭活剂进行的，是目前常用的灭活方法。常用的灭活剂有甲醛、乙酰乙烯基亚胺、乙烯亚胺、β-丙酸内酯等。甲醛的灭活原理是它能使微生物的蛋白质、核酸变性，导致死亡，但不明显影响其免疫原性。

一般情况下，佐剂属于免疫增强剂中的一类，单独使用时一般没有免疫原性，与抗原物质合并使用时，能增强抗原物质的免疫原性，增强机体的免疫应答，或者改变机体免疫应答类型。选择佐剂的同时应考虑其免疫增强作用和安全性。世界卫生组织及一些专家认为，生物制品的佐剂，应符合以下条件：一是无致癌性和辅助致癌作用；二是无毒性；三是吸附力强、易于吸收；四是不含与机体有交叉免疫反应的物质，本身不引起机体的超敏反应，也不会与机体自身物质结合引起不良反应导致损伤；五是能经1～2年保存不变质、不明显降低效力、不出现不良反应。佐剂的类型一般由氢氧化铝胶、弗氏佐剂、白油佐剂、矿物油、水花生油乳剂、吐温-80、司盘、左旋咪唑、脂质体等，与抗原混合成悬浊状态，尽可能延长在注射部位的贮留时间，从而持续不断地刺激机体免疫系统，以产生较强的免疫应答；可出现免疫增强的作用。

发明内容：

为了解决目前鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合症引起的发病率高，死亡率高的问题，本发明的目的是提供一种禽用三联灭活疫苗及制备方法，使三种抗原间的免疫干扰尽最大可能降低，降低畜擒死亡率，减少养殖专业户的损失，造福于人类。

为了实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

所述的禽用三联灭活疫苗及制备方法，其采用生物组合配比，其中：灭活的3倍浓缩NDV La Sota株病毒液重量比：8.0～12.0％；灭活的3倍浓缩IBV M41株病毒液8.0～12.0％；灭活的EDSAV127株病毒液9.0～14.0％；并配合以白油50～70％，吐温-801～3％，司本-802～4％，硬脂酸铝1～3％，采用了纤维膜超滤浓缩法，采用低温灭活，采用新的佐剂，制成灭活疫苗的油苗。

该禽用三联灭活疫苗及制备方法，采用了纤维膜超滤浓缩法，可提高免疫抗原在疫苗终产品的浓度达3倍以上，纤维膜超滤浓缩装置，设有二级孔径不同的纤维滤柱，一级滤柱的纤维可滤除部分细菌和杂质，二级超滤株的中空纤维可截留病毒粒子。

该禽用三联灭活疫苗及制备方法，IBV M41病毒液创新采用低温灭活，2-8℃经120-145小时，并将浓缩后的DNV La sota和EDSAV127病毒液，分别加入0.05～0.15％甲醛溶液，经35～38℃灭活12～17小时，可彻底灭活病毒，并不影响其免疫原性。