[发明专利]基于磁性纳米粒子的单核苷酸多态性(SNP)检测方法

权利要求书

1.一种基于磁性纳米粒子的单核苷酸多态性分型方法，包括下述步骤：

(a)选取待检测功能SNP位点。设计一对扩增引物(一条标记生物素)和两条带有标记物的野生和突变检测探针。

(b)通过PCR扩增出包含有待测SNP位点的靶序列，然后将其固定到亲合素包被的磁性纳米粒子上，构成磁性纳米粒子-DNA复合物。

(c)磁性纳米粒子-DNA复合物变性后，与两条等位基因特异性探针杂交。通过控制杂交温度，使野生纯合型样本只与野生探针匹配，突变纯合型样本只与突变探针匹配，杂合型样本与两种探针均匹配。

(d)将杂交有检测探针的磁性纳米粒子经洗涤、变性、磁分离后，通过检测变性下来探针上的标记物来实现对样本的SNP分型。

2.根据权利要求1所述的SNP分型方法，其特征在于所述的通过PCR扩增出的标记生物素的靶序列直接固定到亲合素包被的磁性纳米粒子上，构成磁性纳米粒子-DNA复合物。

3.根据权利要求1、2所述的SNP分型方法，其特征在于所述的磁性纳米粒子-DNA复合物与检测探针在杂交体系中完成杂交。

4.根据权利要求1、3所述的SNP分型方法，其特征在于SNP位点分型所使用的野生和突变检测探针分别两等位基因互补，且待检测位点位于探针序列的中间。

5.根据权利要求1、3所述的SNP分型方法，其特征在于SNP位点分型所使用的两条检测探针一段带有标记物，其可以分别带有两种不同荧光标记物，也可以带有相同标记物，如纳米金、化学发光物、荧光标记物等。

6.根据权利要求1、3所述的SNP分型方法，其特征在于所述PCR反应、杂交、变性和洗涤步骤均在多孔PCR板中进行。

7.根据权利要求1、5所述的SNP分型方法，其特征在于所述步骤(d)中检变性下来的探针上的标记物的方法选荧光检测法、化学发光法、银染法中的一种。