[发明专利]一种降低蛋黄胆固醇含量的微生物饲料添加剂的制备方法

说明书

技术领域

一种利用乳酸菌和枯草芽孢杆菌调控蛋禽的胆固醇代谢途径，从而降低禽蛋生产中蛋黄胆固醇含量的微生物饲料添加剂及制备方法，能有效降低禽蛋蛋黄的胆固醇含量，同时降低禽蛋中抗生素残留含量，属于农业生物制品技术领域。

背景技术

我国是世界上最大的禽蛋生产国和消费国，但是禽蛋品质水平较低，主要是在蛋禽养殖中由于高密度的饲养，添加了大量的预防蛋禽疾病的抗生素，造成抗生素、兽药、饲料添加剂残留严重超标；同时饲料中添加的动物源蛋白使蛋黄中的胆固醇含量很高。

通过对蛋禽体内的胆固醇代谢途径的研究表明：在胆固醇代谢过程中，胆固醇主要代谢产物——胆酸在肝脏和肠道中存在着肠肝循环，在其通过肠道时，由于肠道菌群的作用生成了大量的胆固醇代谢物。肠道某些菌属如梭菌、链球菌、类杆菌、双歧杆菌、优杆菌、乳杆菌等在肠道具有促进牛磺胆酸脱饱和或脱羟基生成石胆酸及其衍生物的作用，肠道菌群可促进胆固醇和胆酸在肠道转化成其它物质，进而减少肠粘膜对这类物质的吸收。和普通鸡相比，无菌鸡肠道内由于一方面未经转化的胆固醇数量大，另一方面随着胆汁酸的增加反馈地抑制了组织内胆固醇的分解代谢而导致鸡血液胆固醇含量的升高，进而导致蛋黄中的胆固醇含量升高。

为改善禽蛋质量，目前主要的方法是在蛋禽日粮中添加能降低蛋黄胆固醇的物质，如添加适量的有机铬、PUDA、环糊精、纤维螯合剂以及壳聚糖等，这些物质都能参与禽蛋中的胆固醇代谢，起到降低含量的作用，但同时其作用机制是独立的，综合效果并不佳，同时还提高了养殖成本和禽蛋中的重金属含量，并不是一种安全的治理方法。

现有的一项国内专利技术，专利号为01128250.9，题为“加有中药的蛋鸡饲料”，其特征在于：加有中药的蛋鸡饲料。所添加的中药有红花、枸杞、龙骨、丹参，按比例与蛋鸡饲料混合制成。通过对鸡喂饲证明，能够提高产蛋鸡的生命活力和新陈代谢能力。其生产是通过简单的药物添加，对禽蛋的胆固醇降低无明显功效。

利用枯草芽孢杆菌发酵大豆在日本有较早的应用，在日本风靡一时的营养保健食品——纳豆，就是利用枯草芽孢杆菌发酵而来，不过由于菌种未经过专门的诱导，其酶解效果差，对大豆蛋白利用较低。

发明内容

本发明的目的是提供一种可大幅度低蛋黄中胆固醇含量的微生物饲料添加剂及制备方法。

为实现以上目的，本发明的技术方案是提供一种降低蛋黄胆固醇含量的微生物饲料添加剂的制备方法，其特征在于，生产菌种通过微波诱导和射线诱导相结合，生产工艺采用复合培养及驯化相结合的发酵技术，培养基中添加促进剂，其生产步骤为：

第一步：发酵菌株选育

a.菌株传代：采用农业部菌种保存中心提供的枯草芽孢杆菌菌株通过营养琼脂培养基传代培养，双歧杆菌、植物乳杆菌、乳酸链球菌通过乳酸菌培养基传代培养，选育生长速度快、菌落特征明显的菌种，在4℃温度下保存菌种；

b.菌种的复合诱导：将保存的枯草芽孢杆菌用0.9％的生理盐水稀释至10^-8-10^-9，在微波炉中用低火处理菌悬液40秒-55秒，利用血球计数法计数，将处理后的菌悬液在淀粉培养基的平板上涂布，在30-40℃温度下倒置培养48小时，选育出培养基中透明圈直径与菌落直径的比值大于0.8的菌落，接种至营养琼脂试管中保存；

将双歧杆菌、植物乳杆菌、乳酸链球菌分别制作菌悬液，将枯草芽孢杆菌制作孢子悬浮液，稀释至10^-5-10^-7，在30cm处用功率为15-20W的紫外灯，波长为260nm，处理15-30秒，处理后的菌悬液在乳酸菌培养基平板中在30-40℃温度下倒置培养48小时，选出生长速度快的菌落进行摇瓶实验，筛选双歧杆菌、植物乳杆菌、乳酸链球菌和枯草芽孢杆菌；

c、生产菌种的制作：将筛选出的双歧杆菌、植物乳杆菌、乳酸链球菌和枯草芽孢杆菌、转接入装有营养琼脂培养基的茄子瓶中，在35-40℃温度下培养45-50小时，待茄子瓶表面菌苔布满，并白中带黄时即可取出，然后放入2-6℃的冰箱中进行保存；

第二步：乳酸菌的液体单独培养：

a.按以下重量百分比称取茄子瓶中各生产菌种：双歧杆菌38-45、植物乳杆菌25-33、乳酸链球菌8-12、枯草芽孢杆菌10-29；