[发明专利]可溶性协同信号分子在检测类风湿关节炎中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及体外检测样品的方法，更具体地涉及运用免疫学技术检测可溶性的协同信号分子的方法。

背景技术

自身免疫病严重危害人类身体健康，以类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)为例，它呈世界性分布，热带少见，温带、寒带多见。在中国人群发病率为0.3％-0.5％，患者约有400～500万，随年龄增加，患病率有增高的趋势，女性与男性发病率比例为3∶1。

自身免疫应答紊乱是导致这类疾病病情持续进展的重要原因。以RA为例，浸润在滑膜组织中的自身反应性T细胞在细胞免疫和体液免疫中发挥关键的致病作用。自身反应性T细胞由外源性抗原或改变的自身抗原所活化，通过粘附分子的作用进入关节，介导细胞免疫和体液免疫，造成滑膜组织损伤。这群T细胞表达活化/记忆性的标志如CD45R、CD44、HLA-DR以及VLA-1等，表明它们处于持续的高活化状态。

对于自身反应性T细胞的持续活化原因，经典的双信号学说认为，T细胞的活化需要TCR与抗原肽：MHC分子复合物介导的第一信号以及由协同信号分子B7-CD28通路提供的第二信号介导。协同信号分子是表达在细胞表面的糖蛋白，它们参与调控TCR信号而促进或抑制T细胞的致敏、活化、生长和分化。根据其对T细胞功能发挥正性或负性调控作用，可将其分为协同刺激分子或协同抑制分子。

PD-1(程序性死亡-1，Programmed death-1)蛋白是表达于活化T、B细胞以及髓系细胞表面的协同抑制受体。PD-1是一种具有免疫调节功能的协同抑制分子，与其配体结合可抑制下游信号事件而抑制T、B细胞增殖和细胞因子的产生。抑制性信号通路受胞浆区ITSM的介导，磷酸化的酪氨酸残基募集SHP-2磷酸酶，使TCR、BCR信号通路成分脱磷酸化而发挥抑制效应。PD-1的作用与抗原剂量密切相关，对低浓度抗原刺激所致的增殖反应有较强的抑制效应。

协同抑制分子CTLA-4、PD-1等在T细胞活化后表达上调而抑制T细胞免疫应答，在维持外周免疫耐受中发挥重要作用。协同刺激信号与抑制信号的平衡一旦打破将会导致自身免疫病等免疫病理现象的发生。

然而，目前仅部分研究了CD28、ICOS在RA患者滑膜液浸润细胞中的表达情况，尚且缺乏深入的机理研究。协同信号分子如PD-1等与RA的确切关系尚不为人们所知，对协同信号分子以及它们的可溶性形式在RA中的系统研究亟待进行。

由此可见，可溶性PD-1及其配体是进一步了解研究RA等自身免疫疾病的自身免疫应答紊乱状态的关键因素之一，因此本领域迫切需要提供一种方法，用此方法可以检测到人体内天然的可溶性PD-1及其配体PD-L1，从而更有效地开展与此类疾病相关的研究。

发明内容

本发明旨在提供一种体外检测液体样品中的可溶性PD-1(sPD-1)及其配体的方法。

本发明的另一个目的是提供这种方法的用途。

在本发明的第一方面，提供了一种体外检测液体样品中可溶性PD-1蛋白或其配体的方法，包括步骤：

(a)将所述样品与抗PD-1的抗体或抗PD-1配体的抗体进行接触，从而形成可溶性PD-1蛋白-抗体复合物或可溶性PD-1配体-抗体复合物；

(b)检测可溶性PD-1蛋白-抗体复合物或可溶性PD-1配体-抗体复合物，从而确定可溶性PD-1蛋白或其配体的存在与否。

在另一优选例中，在步骤(b)通过夹心法检测可溶性PD-1蛋白-抗体复合物或可溶性PD-1配体-抗体复合物。

在另一优选例中，它包括步骤：

(1)将PD-1或其配体的抗体包被固相载体，得到包被有PD-1或其配体的抗体的固相载体；

(2)在包被有PD-1或其配体的抗体的固相载体上加入液体样品；

(3)加入酶标记的不同种属抗PD-1或其配体抗体；

(4)加入底物进行酶催化反应。

在另一优选例中，所述的PD-1或其配体的抗体为多克隆抗体。

在另一优选例中，所述的配体是PD-L1。

在另一优选例中，所述的PD-1或其配体为人PD-1或其配体。

在另一优选例中，所述的液体样品包括血清、血浆、滑膜液、尿液或乳汁等。

在本发明的第二方面，提供了一种抗可溶性PD-1蛋白或其配体的抗体的用途，它可用于制备辅助性检测类风湿关节炎的试剂或试剂盒。

在另一优选例中，所述的试剂是一固相载体，所述的固相载体上固定有抗PD-1或其配体的抗体。

在另一优选例中，所述的试剂盒包括：

固相载体，