[发明专利]一种利用多菌种综合治理养殖水体制剂及制备方法

权利要求书

1.一种利用多菌种综合治理养殖水体制剂，其特征在于，由下述重量百分比的原料配制而成：沼泽红假单胞菌25-32％、乳酸菌18-22％、啤酒酵母菌15-20％、枯草芽孢杆菌15-23％、放线菌4-26％。

2.根据权利要求1所述的一种利用多菌种综合治理养殖水体制剂的制备方法，其特征在于，采用富集的多种改良水体的有益菌种，利用诱导选育与定向培养相结合进行优化选育，采用复合培养与驯化培养相结合的发酵技术，在发酵过程中添加适于多种菌体共生的生长因子，在后处理中添加适于菌体长期作用的载体，其步骤为：

第一步：生产菌株的选育

a.菌种选育：在健康的野生鲫鱼肠道分泌物中利用乳酸菌培养基分离出植物乳杆菌，在污水处理厂的活性污泥中利用营养琼脂培养基分离出枯草芽孢杆菌，在啤酒发酵废料中利用酵母选择培养基分离出啤酒酵母菌，在养殖水体良好的虾塘中利用光合细菌培养基分离出红假单胞菌，在污水处理厂附近土壤中营养琼脂培养基分离出放线菌，在实验室中作菌种保存；

b.诱导育种：将以上五种菌种在紫外线的照射下进行诱导，进行平板稀释计数，选育出体形规则、生长速度快、特征明显的菌株加以保存；

c.菌种摇瓶试验：将红假单胞菌接种于光合细菌培养基、植物乳杆菌接种于乳酸菌培养基、啤酒酵母菌接种于麦氏琼脂、枯草芽孢杆菌接种于营养琼脂中，在35-40℃温度下培养22-28小时，进行划线分离，选育出生长快、菌体特征明显的光合细菌、乳酸菌、酵母菌、芽孢杆菌、放线菌，在实验室中保存，再接种于以上的液体培养基中，在35-40℃温度下进行培养24-36小时的摇瓶培养，并活菌计数到至少10亿/克为止；

d.生产制种：将菌种转接入装有营养琼脂作培养基的茄子瓶中，在35-40℃温度下培养45-50小时，待茄子瓶表面菌苔布满，并白中带黄时即可取出。然后放入2-6℃的冰箱中保存；

第二步：有益菌株的单独及复合培养

a.按重量配比称取通过步骤1生产制种好的各种菌种；

b.乳酸菌、酵母菌、光合细菌的复合培养：将乳酸菌、酵母菌、光合细菌即沼泽红假单胞菌混合接种于120-130℃、30-45min高温灭菌的培养基中，在发酵罐中搅拌30min，其转速为200-240r/min，搅拌均匀后放入200L消毒后的塑料桶中静置10-15天，静置过程中每天测定Ph值并释放产出的气体，防止饲料桶爆裂，待Ph到达3.0-4.0时发酵结束；

c.枯草芽孢杆菌、放线菌的复合培养：将枯草芽孢杆菌、放线菌混合接种于120-130℃、30-45min高温灭菌的枯草芽孢合放线菌的复合培养基中，搅拌转速为200r/min-240r/min，培养温度为35-40℃，通气量1∶1，发酵时间为22-26小时，显微镜下观察90-95％生孢时结束；

第三步：菌群的驯化和扩大培养

a.将培养后的菌液按4-6％添加比例接种于120-130℃、30-45min高温灭菌的驯化和扩大培养基中，在发酵罐中搅拌30min，其转速为200-240r/min，搅拌均匀后放入200L消毒后的塑料桶中静置10-15天，静置过程中每天测定Ph值并释放产出的气体，防止饲料桶爆裂，待Ph值到达3.0-4.0时发酵结束；

b.发酵过程中取样三次，测定水分和Ph值。发酵结束后取样，测定水分、Ph值和活菌含量；

第四步：添加载体

a.发酵好的扩大培养液按0.5-1％比例添加120-130℃、30-45min高温灭菌的载体，倒入搅拌均匀；

b.添加好的发酵产品的主要参数：活菌总数15亿-25亿/克，pH值3.0-4.0，物理性状：深褐色液体，含少量白色沉淀物。

3.根据权利要求2所述的一种利用多菌种综合治理养殖水体制剂的制备方法，其特征在于，所述乳酸菌、酵母菌、光合菌培养基是无菌水和粕粉、尿素、硫酸铵、麦麸、酵母粉、玉米粉、糖蜜、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸镁、硫酸镁中的至少两种混合物，其重量百分配比为：糖蜜16-22％、硫酸镁0.5-1.5％、硫酸铵1-3％、磷酸二氢钾0-1％、磷酸氢二钠0-1％、尿素1-3％、无菌水71.5-81.5％。