[发明专利]一种促进肥牛肌腱发育的多肽及微生物制剂及制备方法

权利要求书

1.一种促进肥牛肌腱发育的多肽及微生物制剂，其特征在于，由纳豆杆菌、地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、啤酒酵母菌制成：其重量百分配比为：纳豆杆菌30-35％、植物乳杆菌15-20％、干酪乳杆菌15-20％、啤酒酵母菌18-20％、地衣芽孢杆菌12-15％；

其中所述促进肥牛肌腱发育的多肽及微生物制剂的制备方法，其采用的菌种通过具有分解大豆蛋白能力的纳豆杆菌和促进动物肠道消化吸收功能的乳酸菌、酵母菌、芽孢杆菌进行选育，利用培养基进行优化选育，生产工艺采用多菌种的复合、分级发酵工艺，每级发酵均有主要的代谢产物，在后处理工艺过程中添加适于菌体生长保存的载体，其制备方法为：

第一步：生产菌株选育

a.菌株筛选：在肉牛的瘤胃中取食糜为菌源，采用MRS乳酸菌培养基进行乳酸菌分离，筛选出植物乳杆菌和干酪乳杆菌和地衣芽孢杆菌；在啤酒发酵液中用酵母选择培养基分离啤酒酵母菌；在大豆发酵中利用营养琼脂培养基分离纳豆杆菌，将分离的菌种分别在营养琼脂培养基中4℃下保存菌种；

b.分离的菌种分别接种于肉汤培养基中，在35-40℃温度下培养22-28小时后，将啤酒酵母菌接种于麦氏(Meclary)琼脂培养基，将纳豆杆菌接种于营养琼脂培养基，将植物乳杆菌和干酪乳杆菌和地衣芽孢杆菌接种于乳酸菌培养基中，进行划线培养，选出生长快、菌体特征明显的纳豆杆菌、地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、啤酒酵母菌分别在实验室中保存；

c.生产制种：最后将选出生长快纳豆杆菌、地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、啤酒酵母菌分别转接入装有营养琼脂作培养基的茄子瓶中，在35-40℃温度下培养45-50小时，待茄子瓶表面菌苔布满，并白中带黄时即可取出。然后放入2-6℃的冰箱中进行保存；

第二步：有益菌株的单独及复合培养

a.按重量配比称取步骤1生产制种的纳豆杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌、啤酒酵母菌和地衣芽孢杆菌；

b.将称取的纳豆杆菌、植物乳杆菌、干酪乳杆菌和啤酒酵母菌混合在一起进行复合培养：将茄子瓶中混合菌苔按1∶25-30的比例接种于120-130℃、30-45min高温灭菌的培养基中，在发酵罐中搅拌30min，其转速为200-240r/min，搅拌均匀后放入200L的消毒后塑料桶中静置10-15天，静置过程中每天测定pH值并释放产出的气体，防止饲料桶爆裂，待Ph到达3.0-4.0时发酵结束；

c.将称取的地衣芽孢杆菌单独培养：将茄子瓶种的地衣芽孢杆菌按1∶25-35的比例接种于120-130℃、30-45min高温灭菌的培养基中，搅拌转速为200r/min-240r/min，培养温度为35-40℃，通气量1∶1，发酵时间为22-26小时，显微镜下观察90-95％生孢时结束；

第三步：菌群的驯化和扩大培养

将步骤2单独和复合培养的菌液混合按1∶25-30的比例接入120-130℃、30-45min高温灭菌的固体扩大培养基中，搅拌30-45min至均匀，倒入50-70kg消毒双层饲料袋中密封发酵，温度30-35℃，时间12-15天，发酵过程中取样三次，测定水分和pH值，发酵结束后取样，测定水分为35-40％、pH值为3.5-4.0；

第四步：粉碎添加特殊载体；

a.干燥：将步骤3发酵完全的产品按时间先后放入培养箱干燥，每盘重量2.0公斤±0.5，温度控制在40-45℃，时间14-16小时，干燥完成的物料水份控制在≤11.8％；

b.添加载体；将干燥后的产品按1∶0.02-0.03的比例添加载体，倒入搅拌机中搅拌均匀；转入粉碎间进行粉碎，物料温度控制在45℃以下，粉碎后的物料过50目筛网，筛后粗料重新粉碎；

c.过筛后装入带有内袋的桶或袋中，扎紧袋口，系好标识牌，转入成品库有序堆放；取样检测，主要参数：水份≤11.8％、活菌数40-60亿/g；物理性状：淡黄色粉末状固体。

2.根据权利要求1所述的一种促进肥牛肌腱发育的多肽及微生物制剂，其特征在于，所述的步骤2复合或单独培养基的重量百分配比为：豆粕2-6％、清糠10-60％、尿素0-3％、硫酸铵0-1％、酵母粉0-3％、玉米粉3-10％、糖蜜0-20％、磷酸二氢钾0-1％、磷酸二氢钠0-2％、磷酸镁0-1％、硫酸镁0-1％、无菌水12-85％。