[发明专利]由肿瘤抗原衍生的优化隐蔽性肽组成的免疫原性多肽及其用途

说明书

技术领域

本发明是有关抗癌疫苗领域。具体来说，本发明涉及用作抗癌疫苗的优 化多肽，其包含免疫原性增强的3种隐蔽性肿瘤肽(cryptic tumor peptides)。

背景技术

最近由抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes，CTL)靶向的 肿瘤相关抗原的确定，打开了旨在激发肿瘤特异性CTL库(tumor-specific CTL repertoire)的肿瘤疫苗的方法之路。

实验性的抗肿瘤疫苗可以是多种形式，包括自由肽、负载有肽或肿瘤裂 解物的树突细胞(dendritic cells)，以及DNA。尽管基于肽的疫苗在可行性方 面比其他的形式更引人关注，但利用占主导地位的肿瘤肽的研究发现，其仅 能引发微弱的免疫学和临床应答，而且伴有患者间的强烈可变性(Rosenberg 等，2004)。几个因素可解释这些相对令人失望的结果。首先，大多数肿瘤抗 原是正常组织包括胸腺也表达的非自身突变蛋白。这就提出了肿瘤特异性 CTL库的耐受性问题(Restifo，2001；Van Pel等，1995)，其涉及占主导地位的 肽而非隐蔽性肽(Cibotti等，1992；Nanda和Sercarz，1995；Restifo，2001)。实 际上，最近证明，隐蔽性肽要比占主导地位的肽能更有效地诱导抗肿瘤免疫 (Gross等，2004)。

其次，基于单个表位的方法诱导了仅针对一种抗原的HLA-限制性CTL 应答，由于肿瘤的遗传不稳定性，而使该抗原可能并不被所有的肿瘤表达 (Brasseur等，1995；Lehmann等，1995)。引发针对多种抗原的CTL应答的方法 可能具有几种潜在优势。特别是，表达至少一种靶抗原就足以触发细胞毒性， 并且肿瘤细胞同时遗失所有靶抗原的可能性很小，特别是，当所讨论的抗原 是细胞存活和肿瘤生长所必需的时。这种方法可引发强烈的免疫应答(Oukka 等，1996)。

最后，广谱癌症免疫治疗应该靶向通用的肿瘤抗原，如TERT、 HER-2/neu、MUC-1和MAGE-A，这些肿瘤抗原被各种肿瘤超表达(Minev 等，2000；Ofuji等，1998；Ogata等，1992；Reese和Slamon，1997；Slamon等， 1987；Van den Eynde和van der Bruggen，1997；Vonderheide等，1999)。这些 抗原大多数都与肿瘤细胞存活和致癌力有关，因此为逃避免疫应答而对它们 进行负调节，可能会对肿瘤生长产生有害作用。

为了回答至少部分上述问题，本发明人将3种通用的肿瘤抗原衍生的优 化隐蔽性肽(TERT_988Y、HER-2/neu_402Y和MAGE-A_248V9)组合于几种28个氨基 酸的多肽中，并且既在HLA-A^*0201转基因(HHD)小鼠体内又在健康人供体 体外评估了所得多肽同时诱导针对所有3种肽的免疫应答的能力。以前，已 经证实了这3种肽都可引发体内和体外抗肿瘤应答(Gross等，2004；Scardino 等，2002)。令人感兴趣的是，由MAGE-A_248v9引发的CTL靶向所有的MAGE-A 抗原(-A1，-A2，-A3，-A4，-A6，-A10，-A12)(Graff-Dubois等，2002)。

如下文所述，本发明人证明了：a)与TERT_988Y、HER-2/neu_402Y和 MAGE-A_248V9的简单混合物相反，由这3种肽组成的多肽能引发多特异性 CTL应答；b)该多肽诱导多特异性CTL应答的能力依赖于其内部的结构：在 对应于这3种肽的所有可能排列的6种变体中，只有一种变体能在几乎所有 的小鼠和人细胞实验中产生三特异性CTL应答。