[发明专利]用于测定具有生物来源和复杂组成的样品中一种或多种分析物的方法及其用途

权利要求书

1.一种用于检测一种或多种生物来源和复杂组成的样品中的一种或多种分析 物的方法，包括以下步骤：

(1)提供一种或多种生物来源和复杂组成的样品，

(2)提供至少一个固体载体，

(3)将少量所述生物来源和复杂组成的样品以稀释或未稀释的形式直接施加 到所述固体载体上的不连续的位点上，或者在预先施加促粘附层之后施加到固体 载体上的所述促粘附层上，从而在所述至少一个固体载体上形成一个或多个不连 续测量区域的阵列，

(4)使至少一个不连续测量区域的阵列与第一溶液相接触，所述第一溶液含 有一种或多种作为待测分析物特异性结合配对物的结合试剂和如果需要的话任选 地含有一种或多种检测试剂，所述分析物存在于所述不连续测量区域中施加的生 物来源和复杂组成的样品中，并且，所述结合试剂和检测试剂可以同时或者顺序 施加，

(5)以空间分辨的方式测量从已在步骤(4)中与第一溶液接触后的一个或多 个阵列的不连续测量区域发出的第一光学信号，

(6)记录所述第一光学信号，

其特征在于，通过进一步进行以下步骤来测定所测得的第一光学信号的比例， 所述第一光学信号是由于与加入的结合试剂和任选加入的检测试剂发生非特异性 相互作用而产生的：

(7a)施加第二溶液，所述第二溶液除了在步骤(4)中加入的第一溶液的一 种或多种结合试剂和任选的一种或多种检测试剂之外，还含有已知高浓度的化合 物，其与待测的并存在于已施加到不连续的测量区域中的生物来源和复杂组成的 样品中的分析物种类相同，作为所述待测的并存在于生物来源和复杂组成样品中 的分析物的竞争剂，该样品已施加到不连续的测量区域中，以使所述结合试剂和 任选另外添加的检测试剂特异性结合到步骤(3)中生成的一个或多个不连续测量 区域的阵列上，和/或

(7b)施加第三溶液，所述第三溶液除了在步骤(4)中加入的第一溶液的所 述一种或多种结合试剂和任选的一种或多种检测试剂之外，还含有已知高浓度的 物质，该物质与步骤(3)中施加样品的样品基质中存在的物质种类类似，以便与 样品基质中的所述物质竞争，所述物质存在于已施加到不连续的测量区域中的生 物来源和复杂组成样品中，以使所述结合试剂和任选另外添加的检测试剂非特异 性结合到步骤(3)中生成的一个或多个不连续测量区域的阵列上，

(8)以空间分辨的方式测量从已在步骤(7a)中与第二溶液和/或在步骤(7b) 中与第三溶液接触后的一个或多个阵列的不连续测量区域发出的第二和/或第三光 学信号，

(9)记录所述第二和/或第三光学信号，以及

(10)比较所述第一和第二和/或第三光学信号。

2.权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物来源和复杂组成的样品可 以选自由以下样品构成的组：细胞群体裂解物、细胞提取物、体液及体液组分， 其中：

(1)所述样品可以是分馏或未分馏的样品，

(2)所述生物来源和复杂组成的样品从健康和/或患病和/或受到刺激和/或未经 处理的细胞中获得，所述细胞来自包括人、动物、细菌和植物细胞的组，

(3)所述生物来源和复杂组成的样品从动物或人的组织如器官、皮肤、毛发、 肌肉、脂肪或骨组织中获得。

3.权利要求1或2所述的方法，其特征在于，施加到测量区域的生物来源和 复杂组成的待分析样品中的物质相当于少于100个细胞的物质，优选相当于少于 10个细胞的物质，和/或表示体积小于100nl，优选小于1nl。

4.权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，施加到不连续测量区域中 的生物来源和复杂组成样品中的待测分析物是蛋白质及其翻译后修饰的蛋白形 式，还有人工修饰或表达的蛋白，单或多克隆抗体以及抗体片段、肽、来自完整 蛋白质的肽片段、糖肽、外源凝集素、荧光蛋白、亲和素、链亲和素、生物素、 生物素化蛋白以及不同缀合的蛋白、寡糖以及核酸。