[发明专利]结合抗体的亲和性配体

说明书

发明领域

本发明涉及共价键合于固体支撑材料、例如聚合物基质的亲和性配体，和其在生物分子、例如蛋白质、特别是抗体、诸如单克隆抗体的纯化和/或分离中的用途。亲和性配体包含两种不同的结构域或官能团：(i)疏水性结构域，和(ii)阳离子结构域。

发明背景

亲和性色谱能够选择性和可逆性吸附生物物质、例如单克隆抗体至互补结合物质、例如亲和性配体，所述亲和性配体固定在固体支撑材料并包装在亲和性柱中。

亲和性柱经常含有固体支撑材料，通常为多孔的聚合物基质，适合的配体与之直接或者借助连接体共价连接。含有具有配体亲和性的生物物质的样品能够在适合的结合条件下与共价固定于固体支撑材料的亲和性配体接触，促进配体与具有配体亲和性的生物物质之间的特异性结合。柱子随后可以用缓冲液洗涤，以除去未键合的材料，在进一步的步骤中可以洗脱具有配体亲和性的生物物质，得到纯化或分离的形式。因此，配体应当优选地表现特异性和可逆性与生物物质、例如抗体结合的特征，这是纯化或分离所需要的。

抗体具有一个或多个Y-形单元副本，由四个多肽链组成。每个Y含有两个相同的“重链”副本和两个相同的“轻链”副本，根据它们的相对分子量如此命名。

基于Y单元的数量和重链的类型，抗体可以分为五类：IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。重链决定了每种抗体的亚类。IgG、IgM、IgA、IgD和IgE的重链分别被称为γ、μ、α、δ和ε。任何抗体的轻链都可以分为κ或λ类型(多肽分子特征的说明)。就药物应用而言，最常用的抗体是IgG，它可以被蛋白水解酶木瓜蛋白酶裂解为三个部分，两个F(ab)区和一个Fc区，或者被蛋白水解酶胃蛋白酶裂解胃两个部分，一个F(ab’)₂区和一个Fc区。

F(ab)区包含抗体的“臂”，它们是抗原结合的关键。Fc区包含抗体的“尾”，在免疫应答中扮演角色，以及充当可用于在一些免疫化学程序中操控抗体的“柄”。抗体上F(ab)区的数量与其亚类一致，决定了抗体的“效价”(大致规定为抗体可以结合其抗原的“臂”的数量)。

术语“抗体”表示免疫球蛋白，无论天然还是完全或部分合成产生的。在该术语中也包括其所有保持特异性结合能力的片段和衍生物。典型的片段是FC、FAB、重链和轻链。该术语也涵盖任何具有结合结构域的多肽，在比较氨基酸序列和免疫球蛋白结合结构域时，该结构域是同源的或大半同源的，例如至少95％同一性。这些多肽可以从天然来源衍生或者部分或完全合成产生。抗体可以是单克隆或多克隆的。抗体可以是任何免疫球蛋白类的成员，包括任何人类球蛋白：IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。不过，在本发明的一种实施方式中，IgG类衍生物是优选的。

术语“抗体片段”表示抗体任何小于全长的衍生物。优选地，抗体片段保留全长抗体的至少显著比例的特异性结合能力。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab′、F(ab′)₂、scFv、Fv、dsFv二体(diabody)和Fd片段。抗体片段可以借助任何手段产生。例如，抗体片段可以是借助完整抗体的片段化作用由酶促或化学过程产生的，或者它可以是从编码部分抗体序列的基因重组产生的。作为替代选择，抗体片段可以是完全或部分合成产生的。抗体片段可以任选地是单链抗体片段。作为替代选择，片段可以包含多条链，它们通过例如二硫键连接在一起。片段也可以任选地是多分子复合体。功能性抗体片段将通常包含至少约50个氨基酸，更通常将包含至少约200个氨基酸。