[发明专利]含有胶原凝集素家族蛋白质或者其变体的喷雾干燥的组合物和其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及治疗或者预防微生物感染疾病的组合物，其包含胶原凝集素家族的至少一个成员蛋白质或者其变体。该组合物适于通过呼吸系统吸入或者直接递送到感染部位的表皮细胞。本发明还涉及以喷雾干燥的形式产生所述组合物以允许直接递送到感染部位的方法。

背景技术

甘露糖结合凝集素(MBL)是已知参与针对微生物感染的先天性免疫的人血液蛋白。MBL识别感染微生物的细胞表面上蛋白质的特定糖基化模式并结合它们以根据下述的三种途径抑制微生物感染：在第一种途径中，MBL结合微生物糖基化的蛋白以形成复合体，然后它激活MBL相关的丝氨酸蛋白酶(MASPs)。MASP又切割C4和C2，导致补体系统的活化。在第二种途径中，结合到糖基化的微生物细胞表面蛋白质的MBL作为调理素并且通过嗜中性粒细胞和巨噬细胞指导吞噬作用。同样结合的MBL还在第三种途径中中和微生物的感染，阻断它们的增殖。因此，MBL针对微生物感染的防御中最重要的最初步骤识别并结合微生物。

MBL是胶原凝集素家族的成员，与其他成员具有共同的结构，该结构由胶原蛋白结构域和糖类识别结构域组成。MBL单体具有32kDa的分子量。它在C-末端具有C型糖类识别结构域(CRD)，在N-末端具有富含半胱氨酸的区域，在它们之间具有胶原蛋白结构域。三个MBL单体通过它们的胶原蛋白结构域结合形成三螺旋复合体。该三螺旋复合体又通过N-末端区中的半胱氨酸形成分子间二硫键，产生六聚体复合体。该三螺旋是所有胶原凝集素家族成员包括表面活性剂蛋白A(SP-A)和D(SP-D)、胶原凝集素-肝脏1(CL-L1)和胶原凝集素-胎盘1(CL-P1)共有的结构特征。因此，属于胶原凝集素家族的这些成员蛋白都具有相似的物理化学性质。已经表明这些胶原凝集素家族蛋白质共有在针对血清以及肺表面的微生物感染的免疫前防御中起重要作用的另一特征(Hans-Jurgen et al，ProteinScience，3：1143，1994)。除了上面列出的，其他家族成员包括CL-43、牛共凝集素和人共凝集素同源物。

已知MBL能够结合多种微生物。MLB最通常结合具有外壳(病毒包膜)的病毒。代表性实例包括：流感病毒(Hartshorn，K.L.et al.，J.Clin.Invest.，91：1414，1993；Kase，T.et al.，Immunol.，97：385，1999)，人免疫缺陷病毒(Ezekowitz，R.A.et al.，J.Exp.Med.，169：185，1989；Haurum，J.C.et al.，AIDS，7：1307，1993)，疱疹病毒(Fischer，C.B.et al.，Scan.J Immunol.，39：439，1994)和SARS冠状病毒(Ksiazek，T.G.et al.，N.Eng.J Med.，348：1953，2003；Peiris，J.S.M.et al.，Lancet，361：1319，2003)。造成普通感冒的鼻病毒预期也是MBL的良好结合者。在细菌中，报导金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)(Neth，O.et al.，Infect.Immunol.，68：688，2000)和流感嗜血菌(Hemophilus influenzae)(Van E.et al.，Clin.Exp.Immunol.，97：411，1994)是良好的结合者，而在真菌中，已知白假丝酵母(Candida albicans)(Tabona，P.et al.，Immunol.，85：153，1995)。

在结合MBL的微生物中，流感病毒、鼻病毒、动物来源的SARS冠状病毒和流感病毒主要通过呼吸上皮的感染引起症状，而金黄色葡萄球菌和流感嗜血菌感染肺。金黄色葡萄球菌可以感染外部伤口，白假丝酵母涉及阴道炎。因为在溶液相中处理MBL不适于治愈这些呼吸疾病和外部伤口，所以需要特定剂型。尽管对MBL有许多研究，但是MBL涉及针对上述上皮和外部伤口中感染的防御的程度还知之甚少。唯一相关的研究是报导在唾液和母乳中MBL的检测的研究(Tregoat，V.et al.，J.Clin.Lab.Anal.，16(6)：304，2002)。