[发明专利]具有减毒日本脑炎病毒基因作为主链的减毒嵌合黄病毒

说明书

技术领域

本发明涉及具有减毒日本脑炎病毒基因作为主链的减毒嵌合黄病毒，其作 为用于预防黄病毒感染的减毒的活疫苗是有用的。

背景技术

目前，已知超过大约60种属于黄病毒科(Flaviviridae)的病毒(以下简 称黄病毒)，包括日本脑炎病毒、西尼罗病毒、登革1-4病毒、黄热病毒、圣 路易脑炎病毒、蜱传脑炎病毒、库宁病毒(Kunjin virus)、中欧脑炎病毒、贾 萨努尔森林病毒、墨累山谷脑炎病毒、鄂木斯克出血热病毒、玻瓦散病毒、俄 罗斯春夏季脑炎病毒、Yokose病毒、Apoi病毒和Aroa病毒。

这些黄病毒具有单链(+)RNA的基因组，并在基因结构方面互相类似。 黄病毒基因组的可读框(ORF)由其5′末端开始编码三个结构蛋白(衣壳(C) 蛋白、前膜(prM)蛋白，其为膜(M)蛋白的前体、和包膜(E)蛋白)和随 后的七个非结构(NS)蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)。

黄病毒的这些结构蛋白和非结构蛋白被翻译成单个多蛋白；翻译的多蛋白 然后被蛋白酶和具有宿主细胞和病毒的蛋白酶活性的NS3蛋白加工，从而导致 形成包含上面所述的三种结构蛋白的成熟病毒体。

众所周知许多上面所述的黄病毒经由昆虫例如蚊子和蜱来感染哺乳动物， 包括人类和鸟类，并引起脑炎和/或发热症状。起初，这些黄病毒物种的每一种 都固有于特定的区域；因此，限制了感染的地方范围。但是，近年来，由于交 通/分配的发展、气候变化等，各种黄病毒感染已经扩展到病原黄病毒的最初生 境以外的地方，从而引起了公共卫生的重要的问题。

在防止病毒感染的扩展中，用疫苗来预防是有效的。然而，尽管如上所述 已经识别了属于黄病毒科的很多病毒，但是在实际应用中仅仅将用于黄热病毒 和日本脑炎病毒感染的减毒活疫苗和用于日本脑炎病毒和蜱传脑炎病毒感染的 灭活疫苗作为用于黄病毒感染的疫苗。尤其是，减毒活疫苗作为廉价的疫苗是 有用的并诱导长期免疫性，但是除了如上所述的那些疫苗以外还没有批准活疫 苗。

在这些情况下，作为快速开发新的用于各种黄病毒感染的减毒活疫苗的方 法，最近一种应用由基因工程技术制备的嵌合黄病毒的策略已经引起大家的注 意。

例如，ChimeriVax^TM-JE是通过将编码黄热病毒疫苗17D毒株的两个结构 蛋白(prM-E)的基因替换为日本脑炎病毒疫苗SA14-14-2毒株的相应基因来 制备的嵌合黄病毒(参见，例如，国际专利公开号No.98/37911的小册子和国 际专利公开号No.01/39802的小册子)。通过存在于与日本脑炎病毒疫苗 SA14-14-2毒株的E蛋白相应的病毒多蛋白中的来自野生型的大量氨基酸突 变，将ChimeriVax^TM-JE减毒到允许其用作疫苗的程度(参见，例如，Arroyo 等人，J.Virol.75:934-942，2001)。

此外，基于这个ChimeriVax^TM-JE的技术，也已经开发了登革1-4病毒的嵌 合黄病毒(ChimeriVax^TM-DEN(1-4))(参见，例如，国际专利公开号No.98/37911 的小册子和国际专利公开号No.01/39802的小册子)，以及西尼罗病毒的嵌合 黄病毒(ChimeriVax^TM-WestNile)(参见，例如，国际专利公开号No.2004/045529 的小册子)，其具有黄热病毒疫苗17D毒株的基因作为主链。

还将这些嵌合黄病毒减毒到允许其用作疫苗的程度，所述减毒主要由存在 于与prM—E蛋白相应的病毒多蛋白中的来自野生型的氨基酸取代所导致。

但是，已经报道了ChimeriVax^TM-DEN1的减毒主要由在用于疫苗生产的细 胞中的该嵌合黄病毒的传代中发生的E蛋白的氨基酸突变导致(参见，例如， Guirakhoo等人，J.Virol.78：9998-10008，2004)。此外，因为不同血清型的登 革病毒的再感染可能是登革出血热发作的原因，所以没有发现该疫苗的实际应 用。