[发明专利]对真性红细胞增多症中JAK2突变的鉴定

权利要求书

1.一种包含617位氨基酸上突变的分离的JAK2蛋白质(Janus 激酶2)，其中所述617位氨基酸上的突变是由缬氨酸到苯丙氨酸的 V617F突变，在以下被称为“JAK2V617F变体”，它的序列显示在SEQ  ID No 1中。

2.编码根据权利要求1的JAK2V617F变体的核苷酸序列。

3.权利要求2的核苷酸序列，其中所述序列是SEQ ID No 2。

4.克隆和/或表达载体，其是病毒或质粒载体或者裸DNA形式， 其特征在于，它包含在哺乳动物细胞中的有效的启动子控制下的根据权 利要求2或3的序列。

5.一种表达根据权利要求1的重组JAK2V617F变体的哺乳动物 细胞。

6.一种制备表达根据权利要求1的重组JAK2V617F的非人转基 因动物的方法，其中所述非人转基因动物是通过同源重组或定向重组在 其基因组中整合有JAK2V617F的编码序列的小鼠或者大鼠。

7.根据权利要求6的方法，其中所述非人转基因动物是JAK2 V617F/JAK2V617F纯合体或者JAK2V617F/JAK2杂合体，所述动物 出现由JAK2V617F诱导的真性红细胞增多症和/或骨髓增生综合征。

8.包含序列SEQ ID No 3或4的10至30个连续核苷酸并且包含 从标志转录起始的ATG开始算起的t1849突变核苷酸的探针或者引物。

9.根据权利要求8的探针或引物，其选自SEQ ID No 5至11和12 所示序列。

10.至少10个核苷酸的寡核苷酸，所述寡核苷酸能够与包含从标志 转录起始的ATG开始算起的t1849突变寡核苷酸的序列ID No.4的JAK2 基因组DNA、cDNA或mRNA杂交。

11.权利要求10的寡核苷酸，其长度为15～25个核苷酸。

12.特异性地识别JAK2V617F变体的单克隆抗体。

13.产生根据权利要求12的抗体的杂交瘤。

14.一种用于检测肿瘤中JAK2V617F变体的试剂盒，其包含一种 或多种引物或探针，用于特异性地检测JAK2基因中G1849T突变的存 在与否。

15.权利要求14的试剂盒，其中所述引物或探针为权利要求8至 11中定义的引物或探针。

16.一种用于确定患者是否患有真性红细胞增多症或涉及JAK2 V617F变体的任何其它骨髓增生综合征的试剂盒，其包含一种或多种权 利要求8至11中定义的探针或引物，用于特异性地检测JAK2基因中 G1849T突变的存在与否。

17.权利要求16的试剂盒，其中所述其它骨髓增生综合征选自红细 胞增多症、白细胞增多症、血小板增多症或骨髓纤维化症。

18.根据权利要求14至17中任一项的试剂盒，其还包含至少一种 选自以下的成分：用于PCR扩增的耐热性聚合酶、一种或多种用于扩 增和/或杂交步骤的溶液和任何允许检测标记物的试剂。

19.一种用于确定患者是否患有真性红细胞增多症或涉及JAK2 V617F变体的任何其它骨髓增生综合征的试剂盒，其包含根据权利要求 12的抗体。

20.一种能够使JAK2V617F变体的表达降低超过50％或超过95％ 的siRNA，其特征在于，它选自以下序列：

-UGGAGUAUGUUUCUGUGGA(SEQ ID No 29)，

-GGAGUAUGUUUCUGUGGAG(SEQ ID No 30)，或

-GAGUAUGUUUCUGUGGAGA(SEQ ID No 31)。