[发明专利]新型穿梭载体

权利要求书

1.含有源于pTB6的区域部分和源于大肠杆菌的质粒部分的双歧杆菌属微生物和大肠杆菌的穿梭载体，其特征在于，其具有：

(1)源于pTB6的区域部分，其含有pTB6的复制原点oriV-repB区域；且不含MembB、MobA、OrfI和oriT区域，和

(2)源于大肠杆菌的质粒部分，其含有大肠杆菌的复制原点pUCOri区域。

2.根据权利要求1记载的双歧杆菌属微生物和大肠杆菌的穿梭载体，其特征在于，源于pTB6的区域部分是含有序列号1的第305-1564位所示的碱基序列构成1260bp的碱基序列的源于pTB6的区域部分。

3.根据权利要求1记载的双歧杆菌属微生物和大肠杆菌的穿梭载体，其特征在于，含有大肠杆菌的复制原点pUC Ori区域的源于大肠杆菌的质粒部分是具有下述(1)和(2)的特征的质粒部分：(1)不含氨苄青霉素抗性基因ampR，(2)缺失了编码氨苄青霉素抗性基因ampR的表达产物-β-内酰胺酶的N末端区域的DNA。

4.根据权利要求1记载的双歧杆菌属微生物和大肠杆菌的穿梭载体，其特征在于，双歧杆菌属微生物是长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)，短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)，动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)，两歧双歧杆菌(Bifidobacteriumbifidum)或青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)。

5.根据权利要求1记载的双歧杆菌属微生物和大肠杆菌的穿梭载体，其特征在于，其平均拷贝数为6-30。

6.根据权利要求1记载的双歧杆菌属微生物和大肠杆菌的穿梭载体，其特征在于，其为pAV001。

7.表达载体，该载体是在权利要求1至6中任一项记载的双歧杆菌属微生物和大肠杆菌的穿梭载体中插入了在双歧杆菌属微生物中能够表达所希望的基因的表达单元的表达载体，所述表达单元具有下述(1)和(2)的特征：

(1)含有与编码来源于长双歧杆菌的组蛋白样DNA结合蛋白质(HU蛋白质)的基因表达相关的启动子和终止子，

(2)在上述(1)的启动子和终止子之间以符合阅读框地连接有所希望的基因。

8.根据权利要求7记载的表达载体，其特征在于，所希望的基因是编码具有抗肿瘤活性的细胞因子的基因、编码血管新生抑制物质的基因或编码能够将抗肿瘤物质的前体转换为抗肿瘤物质的酶的基因。

9.根据权利要求8记载的表达载体，其特征在于，编码能够将抗肿瘤物质的前体转换为抗肿瘤物质的酶的基因是胞嘧啶脱氨酶基因。

10.经权利要求1-6中任一项记载的双歧杆菌属微生物和大肠杆菌的穿梭载体转化的双歧杆菌属微生物。

11.根据权利要求10的双歧杆菌属微生物，其是长双歧杆菌、青春双歧杆菌、两歧双歧杆菌、假长双歧杆菌、嗜热双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌或动物双歧杆菌。

12.经权利要求7记载的表达载体转化的双歧杆菌属微生物。

13.根据权利要求12的双歧杆菌属微生物，其是长双歧杆菌、青春双歧杆菌、两歧双歧杆菌、假长双歧杆菌、嗜热双歧杆菌、短双歧杆菌、婴儿双歧杆菌或动物双歧杆菌。

14.源于pTB6的双歧杆菌属微生物的质粒复制单元，其特征在于，含有pTB6的复制原点oriV-repB区域，不含MembB、MobA、OrfI和oriT区域。

15.根据权利要求14记载的源于pTB6的双歧杆菌属微生物的质粒复制单元，其特征在于，其含有序列号1的第305-1564位所示的碱基序列构成1260bp的碱基序列。