[发明专利]用于从稳定剂中纯化核酸的组合物和方法

说明书

优先权声明

本专利申请要求2004年11月5日提交的美国申请系列号60/625513和2005年9月13号提交的美国申请系列号60/716451作为优先权。本申请要求获得所列出的这些申请的利益，这些申请的全文被纳入本文作为参考。

技术领域

本发明涉及从样品中分离RNA、DNA或两者的材料和方法。

背景

核酸，如脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)被广泛应用于分子生物学领域，用于研究和临床分析。存在大量的从生物学样品中分离DNA和RNA的方法，这些方法需要分裂细胞，将核酸释放到溶液中。RNA对降解高度敏感。因此，也存在保护RNA不被RNA降解酶(如RNA酶)降解的方法。然后可从DNA、蛋白质和其它污染物中分离出RNA。这些分离方法通常以逐步的方式实施，其中细胞在已知RNA酶活性的条件下裂解，接着在分开的步骤中被进一步纯化。也已开发了在采集时稳定化RNA的各种方法，以允许在进一步纯化该RNA前存储该样品。

目前的核酸稳定化产品系统仅允许有限的纯化选择。例如，这些稳定化产品系统和它们的试剂使使用者的选择限制于采集管制造商特别涉及的纯化产品。这些方法受限于它们的多功能性，即它们要么需要专用的主要涉及、要么难以使用，要么受限于从相同样品中分离RNA和DNA两者的能力。因此，使用者需要选择用于RNA或DNA的“稳定化”试管，并需要为它们分别购买单独的核酸分离试剂盒。

概要

本发明的制剂和方法允许从相同样品中抽提和纯化RNA、DNA或两者，从而为使用者提供了方便。此外，本发明的制剂和方法适用于许多制造商的采集管，从而为使用者提供了简单、灵活和成本节省的方案，不论他们选用了何种采集管。

随着用于保存和稳定生物样品中核酸的的采集管和试剂的开发，需要能使终端用户的选择能够从相同样品中有效分离RNA、DNA或两者的方法。目前，使用者必须购买分别用于DNA和RNA的试剂盒和采集管。可从商业途径获得几种用于样品保存和稳定的方法。但是，没有能够从同一试管中抽提DNA和RNA两者的材料、方法和试剂盒。

本发明提供一种从含有RNA的测试样品中分离RNA的方法，该方法包括：从稳定化的样品中制备粗裂解物；将该粗裂解物与含有pH约为7-9的缓冲液、碱和两亲试剂的增溶溶液接触；使该样品与pH缓冲为约大于7的裂解溶液(pH约大于7的缓冲裂解溶液)接触，产生分离样品，其中该裂解溶液含有络合盐；使该分离样品与固相载体接触，使得分离样品中含有基本上未降解RNA的核酸结合到该固相载体上；用一种或多种洗涤溶液洗涤该固相载体，除去结合于该固相载体的核酸之外的物质，该结合的核酸含有基本上未降解的RNA；和从该固相载体上将所述结合的基本上未降解的RNA洗脱，获得基本上纯且未降解的RNA。

本发明还提供一种从含有DNA的测试样品中分离DNA的方法，该方法包括：从稳定化的样品中制备粗裂解物；将该粗裂解物与含有pH约为7-9的缓冲液、碱和两亲试剂的增溶溶液接触；使该样品与pH缓冲为约大于7的裂解溶液接触，产生分离样品，其中该裂解溶液含有络合盐；使该分离样品与(i)含有缓冲液、锂盐和两亲试剂的结合溶液，或(ii)含有锂盐和醇的洗涤溶液接触，得到结合样品；使该结合样品与固相载体接触，使结合样品中含有基本上未降解DNA的核酸结合到该固相载体；用一种或多种洗涤溶液洗涤该固相载体，除去结合于该固相载体的核酸之外的物质，该结合的核酸含有基本上未降解的DNA；和从该固相载体上将所述结合的基本上未降解的DNA洗脱，获得基本上纯且未降解的DNA。

本发明还提供一种从样品中分离DNA和RNA两者的方法，该方法包括：将所述样品分装到第一试管和第二试管中(或在将增溶溶液加到该样品中后再分装)；根据上述分离RNA的方法分离第一试管中的样品中的RNA；和根据上述DNA分离方法分离第二试管中的样品中的DNA。