[发明专利]用于从稳定剂中纯化核酸的组合物和方法

权利要求书

1.一种从含有RNA的测试样品中分离基本上纯和未降解的RNA的方法，该方法包括：

(a)使样品与增溶溶液接触，该增溶溶液含有pH约为7-9的缓冲液、碱、两亲试剂；

(b)将该样品与pH约大于7的缓冲裂解溶液接触，得到分离样品，其中该裂解溶液含有络合盐；

(c)将分离样品与固相载体接触，使分离样品中含有基本上未降解RNA的核酸结合到该固相载体；

(d)用一种或多种洗涤溶液洗涤该固相载体，除去除结合于固相载体的含有基本上未降解RNA的核酸之外的其它物质；和

(e)从该固相载体上洗脱该结合的基本上未降解的RNA，获得基本上纯和未降解的RNA。

2.一种从含有DNA的测试样品中分离DNA的方法，该方法包括：

(a)将样品与含有pH约为7-9的缓冲液、碱和两亲试剂的增溶溶液接触；

(b)使该样品与pH约大于7的缓冲裂解溶液接触，产生分离样品，其中该裂解溶液含有络合盐；

(c)使该分离样品与(i)含有缓冲液、锂盐和两亲试剂的结合溶液，或(ii)含有锂盐和醇的洗涤溶液接触，得到结合样品；

(d)使该结合样品与固相载体接触，使结合样品中含有基本上未降解DNA的核酸结合到该固相载体；

(e)用一种或多种洗涤溶液洗涤该固相载体，除去除结合于固相载体的含有基本上未降解DNA的核酸之外的物质；和

(f)从该固相载体上将所述结合的基本上未降解的DNA洗脱，获得基本上纯且未降解的DNA。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述测试样品是沉淀。

4.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述增溶溶液中的缓冲液是Tris HCl。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述增溶溶液中缓冲液的浓度约为10-20mM。

6.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述增溶溶液中碱的浓度约为20-50mM。

7.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述增溶溶液还含有两亲试剂。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述两亲试剂是去污剂。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述去污剂是非离子、阴离子、阳离子或两性离子去污剂。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述非离子去污剂选自Tween类、Triton类、Tergitols、Nonidets或Igepal。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述去污剂的浓度约为5-15％。

12.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述增溶溶液还含有螯合剂。

13.如权利要求12所述的方法，其特征在于，所述螯合剂是乙二胺四乙酸(EDTA)。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述螯合剂的浓度约为1-20mM。

15.一种从含有RNA的测试样品中分离基本上纯和未降解的RNA的方法，该方法包括：

(a)使测试样品与胍盐稳定剂和醇接触

(b)离心该测试样品，形成粗的裂解物沉淀和上清液；

(c)除去上清液；

(d)使该粗的裂解物与pH约大于7的缓冲裂解溶液接触，得到分离样品，其中该裂解溶液含有络合盐；

(e)将分离样品与固相载体接触，使分离样品中含有基本上未降解RNA的核酸结合到该固相载体；

(f)用一种或多种洗涤溶液洗涤该固相载体，除去除结合于固相载体的含有基本上未降解RNA的核酸之外的物质；和

(g)从该固相载体上洗脱该结合的基本上未降解的RNA，获得基本上纯和未降解的RNA。

16.如前述任一项权利要求所述的方法，其特征在于，所述裂解溶液还含有缓冲液、两亲试剂和络合盐，但不含有强离液物质。

17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述离液物质是胍盐和/或脲。

18.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述缓冲液是Tris-HCl。