[发明专利]用于预防和/或治疗龋齿的手段和方法

说明书

本发明涉及属于乳酸细菌组的微生物，其特征在于它能够特异性结合 至变形链球菌(Streptococcus mutans)，其中特异性结合(i)抗热处理；和/ 或(ii)抗蛋白酶处理；和/或(iii)是钙依赖性的；和/或(iv)在pH 4.5和8.5范 围间形成；和/或(v)在唾液存在下形成。优选地，此特异性结合可如下分析：

(a)将所述微生物生长至稳定期；

(b)将所述微生物与已经生长至稳定期的变形链球菌混合；

(c)将步骤(b)得到的混合物在允许所述微生物与变形链球菌形成 聚集体的条件下温育，和

(d)通过沉淀的出现检测聚集体。

本发明的另一个方面是经热灭活或冻干的所述微生物的类似物或碎片 (fragment)，其中所述微生物的类似物或碎片保留特异性结合至变形链 球菌的能力。此外，本发明包含用于食品、饲料或饮料的组合物和添加物 (additive)，其包含特异性结合至变形链球菌的属于乳酸细菌组的微生物 或者其类似物或碎片。此外，本发明提供所述微生物或其所述类似物或碎 片用于制备防龋(anticariogenic)的组合物或药物组合物或防龋的食品或 饲料的用途以及用于产生所述组合物或者食品或饲料的方法。

变形链球菌在龋齿发展中起核心作用。变形链球菌将蔗糖代谢为有机 酸，因此产生酸性微环境。这一方面对嗜酸性较弱的非生龋性口腔蚀斑细 菌提供了有利条件。另一方面，有机酸使牙釉质脱矿质，引起龋性损害。 此外，变形链球菌合成可促进蚀斑发生并提高变形链球菌粘附至牙齿表面 的非水溶性的葡聚糖基质。

与龋齿发展有关的其它细菌种如乳酸细菌或放线菌(actinomycetes) 的作用仍无定论。这些细菌常常在龋性损害中发现，但是仅在变形链球菌 同时发现时。就目前所知，存在变形链球菌是发生龋齿的必备条件。

变形链球菌对牙齿表面的初始结合通过两种机制发生。第一种机制是 变形链球菌通过链球菌的一种表面蛋白质-抗原I/II(SA I/II)结合至表 膜，这是在牙齿表面上的一层唾液蛋白质，其中抗原I/II的同义词还称作 B、IF、P1、SR、MSL-1或Pac。已经证实抗此表面蛋白质的抗体在体外 (in vitro)阻止了变形链球菌的附着。

因此，链球菌抗原I/II(SA I/II)是用于接种的靶标。在不同的重组组 合即完整抗原、唾液结合区域、与霍乱毒素缀合或在无毒沙门氏菌菌株表 面表达的蛋白质中，已经证实成功地免疫动物。这产生IgA高滴度以及变 形链球菌群集减少(Huang等，Infect.Immun.69(2001)，2154-2161)。可比 较的结果已经使用编码SA I/II的DNA疫苗成功获得(Fan等，J.Dent.Res. 81(2002)，784-787)。

被动免疫已经通过抗SA I/II抗体在乳酸细菌表面的重组表达成功实 施。这些乳杆菌属(lactobacilli)细菌使变形链球菌聚集并且向大鼠施用 细菌导致龋齿发展减少(Krueger等，Nature Biotechnology 20(2002)，702- 706)。

链球菌抗原的最重要结合对象是唾液凝集素，这种蛋白质与来自清除 受体富含半胱氨酸的超家族的肺糖蛋白糖蛋白gp-340a相似(Prakobphol等，J.Biol.Chem.275(2000)39860-39866)。