[发明专利]产多形性蛋白质序列的位点特异性系统

权利要求书

1.单个重组核酸分子或核酸分子对，所述分子含有：

操作性连接于供体模板区(TR)的可变区(VR)；

其中，所述TR操作性连接于逆转录酶编码序列并且是指导所述VR位点特异性诱变的模板序列，和

所述单个分子不是衍生的、只含有Bvg+嗜性噬菌体-1(BPP-1)噬菌体的主要嗜性决定子(mtd)基因、atd区和/或brt编码序列中一个或多个的缺失突变。

2.如权利要求1所述的分子，其特征在于，所述TR的序列是由于在所述TR中一个或多个腺苷酸被取代、或VR中的一个或多个非腺苷酸在TR中被腺苷取代、或VR中的腺苷酸在TR中被非腺苷酸取代所产生的VR中序列的有缺陷的直接重复。

3.如权利要求1或2所述的分子，其特征在于，所述VR是编码靶分子结合伴侣的序列的全部或一部分。

4.如权利要求3所述的分子，其特征在于，该分子还包含编码所述结合伴侣的全部序列，其中所述VR可以是编码所述结合伴侣的序列的3’部分。

5.如权利要求3或4所述的分子，其特征在于，所述结合伴侣结合细胞表面分子、激素、生长或分化因子、受体、受体的配体、细菌细胞壁分子、病毒颗粒、免疫或免疫耐受因子、或MHC分子。

6.如权利要求3或4所述的分子，其特征在于，所述结合伴侣是细菌素。

7.如权利要求1-6中任一项所述的分子或分子对，其特征在于，所述TR和RT编码序列在异源启动子如fha启动子控制下转录。

8.一种含有权利要求1-7中任一项所述分子或分子对的细胞。

9.一种制备权利要求1所述单个分子的方法，其特征在于，所述方法包括：

将含有所述VR的第一核酸分子操作性连接于含所述TR的第二核酸分子，所述TR是指导所述VR位点特异性诱变的模板序列。

10.一种制备权利要求7所述单个分子或分子对的方法，其特征在于，所述方法包括：

将异源启动子序列操作性连接于含所述TR和RT编码序列的核酸分子。

11.一种位点特异性诱变感兴趣核酸序列的方法，其特征在于，所述方法包括：

获得权利要求1所述的核酸分子或分子对，其中，所述VR含所述感兴趣的核酸序列，且所述TR是所述感兴趣序列的有缺陷的无缺陷的重复，

其中，所述TR是操作性连接于所述感兴趣的序列以指导该序列位点特异性诱变的模板序列，且所述TR是由于所述感兴趣序列中一个或多个腺苷酸被非腺苷酸取代或一个或多个非腺苷酸被腺苷酸取代而产生的有缺陷的重复；和

在细胞中表达所述核酸分子，所述感兴趣序列的一个或多个核苷酸位点被不同核苷酸取代。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，其中所述感兴趣序列的一个以上核苷酸位点被取代。

13.如权利要求11或12所述的方法，其特征在于，所述感兴趣的序列编码靶分子结合伴侣的全部或部分。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述结合伴侣的结合性被改变。

15.如权利要求13或14所述的方法，其特征在于，所述VR是编码所述结合伴侣的序列的3’部分。

16.如权利要求13或14或15所述的方法，其特征在于，所述结合伴侣结合细胞表面分子、激素、受体、受体的配体、细菌细胞壁分子、病毒颗粒、或MHC分子。

17.如权利要求13或14所述的方法，其特征在于，所述结合伴侣是细菌素或细菌噬菌体部分。

18.一种分离的核酸分子，其包含：

供体模板区(TR)和操作性连接的RT编码序列，

其中所述分子不来自Bvg+嗜性噬菌体-1(BPP-1)、Bvg-嗜性噬菌体-1(BMP-1)、或Bvg不区分噬菌体-1(BIP-1)噬菌体。

19.如权利要求18所述的分子，其特征在于，所述分子分离自噬菌体、细菌的原噬菌体、细菌或螺旋体。

20.如权利要求1所述核酸分子的集合或分子库。

21.如权利要求20所述的核酸分子集合或分子库，其特征在于，所述VR经历TR指导的多样化。