[发明专利]回肠炎诊断测定

说明书

                        发明背景

发明领域

本发明主要涉及用来检测抗细胞内劳森氏菌(Lawsonia intracellularis)抗体的改进的免疫测定法，以及含有细胞内劳森氏菌(L.intracellularis)脂多糖的抗原性提取物并且优选基本上由其组成的有效抗原。优选的测定法是具有极好特异性和灵敏度的间接型ELISA测定，采用这种测定法能够在疾病的临床征兆出现之前在感染的最初阶段检测动物衍生标本中低水平的抗体。

现有技术描述

猪增生性肠炎(PPE)，也称为回肠炎、肠腺瘤病、出血性肠病或坏死性肠炎，是一种自然产生的疾病，它能够影响幼年(waning)到青壮年的猪。以前认为PPE是由camplyobacter样生物或回肠共生胞内菌(ileal symbiont intracellularis)造成的。最近确定其病原体是细胞内劳森氏菌，这是一种专性胞内革兰阴性菌。这种疾病会造成受感染动物的死亡损失、医疗费用增加、增重情况差以及食物转化率降低，因此具有经济重要性。

合理治疗和有效控制PPE的一个关键因素是快速准确地鉴定病原体。可通过观察肉眼损伤(gross lesion)来诊断PPE并可通过观察到特定组织病理学(hystopathological)损伤加以证实，其中可通过包括使用抗劳森氏菌(anti-Lawsonia)单克隆抗体的专门染色方法来证实胞内弯曲杆菌。理想的是，通过分离病原体作出最终的判定。然而，分离和培养细胞内劳森氏菌要求专门的细胞培养技术。

过去已经尝试过开发检测抗劳森氏菌抗体的快速测定法。目前的基于血清学的测定法如间接荧光抗体测试(IFAT)和免疫过氧化物酶测定(IPMA)证实，检测死前猪血清中的抗劳森氏菌抗体有良好的灵敏度和特异性。Knittel JP，Jordan DM，Schwartz KJ等，《对用于死前检测接触细胞内劳森氏菌的猪的聚合酶链反应和血清学方法的评价》(Evaluation of Antemorten Polymerase Chain Reaction and Serological Methods forDetection of Lawsonia intracellularis-exposed Pigs).American Journal of VeterinianResearch.59：722-726(1998)。Guedes RMC，Gebhart CJ，Deen J等，《证实免疫过氧化物酶单层测定可作为猪增生性肠病的血清学测试》(Validation of anImmunopreoxidase Monolayer Assay as a Serological Test for Porcine ProliferativeEnteropathy).Journal of Veterinarian Diagnostic Investigation.14：528-530(2002)，这些参考资料的教义和内容通过引用纳入本文。然而，这些测定法对于检测通常在最初接触和感染开始期间在猪血清中发现的较低浓度的抗劳森氏菌抗体都不够灵敏。此外，这些现有测定法依靠非常熟练的技术人员以准确进行测试和解释结果，例如，结果是花数小时观察显微镜、分析用UV或自然光照亮的孔、搜索被代表“阳性”样品的绿色荧光或红色荧光染色的细胞内劳森氏菌或细胞内劳森氏菌感染的细胞而主观获得的。

也已经开发了用于检测抗劳森氏菌抗体的酶联免疫测定法(ELISA)。这些之前的努力由于各种限制而无法进行足够灵敏和特异的测定，所述限制包括抗原质量差和数量少、抗体效价的可变性、感染和非感染猪之间抗体效价的重叠、缺乏有效的阳性/阴性“截止(cut-off)”值以及猪抗体和非特异性抗原组分之间的交叉反应。HolyoakePK，Cutler RS，Caple IW，Monckton RP.《用于检测猪血清中回肠共生胞内菌特异性免疫球蛋白G应答的酶联免疫吸附测定法》(Enzyme-linked Immunosorbent Assay forMeasuring Ileal Symboint intracellularis-specific Immunoglobulin G Response in Sera inPigs).Journal of Clinical Microbiology.31：1980-1985(1994)，其教义和内容通过引用纳入本文。

因此，本领域需要一种高度灵敏和特异的改进的抗劳森氏菌抗体测定法，该方法能够在感染早期阶段准确检测动物衍生标本中低浓度的抗体。