[发明专利]通过PCR检测反刍动物DNA

权利要求书

1.扩增样品中反刍动物DNA的方法，所述方法包括：

使来自所述样品的核酸与RNA酶接触，从而生成RNA酶处理的核酸；和

用第一反刍动物特异性引物和第二反刍动物特异性引物扩增所述RNA酶处理的 核酸，从而扩增所述样品中存在的反刍动物DNA并生成扩增的反刍动物DNA。

2.权利要求1的方法，其中在使所述核酸与RNA酶接触之前从所述动物饲料分离 所述核酸。

3.权利要求1的方法，其中所述反刍动物DNA是选自牛DNA、绵羊DNA、山羊 DNA的一员，及其组合。

4.权利要求1的方法，其中所述RNA酶是选自RNA酶A、RNA酶B、RNA酶D、 RNA酶E、RNA酶H、RNA酶I、RNA酶P、RNA酶S、RNA酶T、RNA酶V 的一员，及其组合。

5.权利要求1的方法，其中所述RNA酶处理的核酸通过将所述分离的核酸与所述 RNA酶在约30℃-约40℃接触约15分钟-约120分钟而生成。

6.权利要求1的方法，其中所述RNA酶处理的核酸通过将所述分离的核酸与所述 RNA酶在约37℃接触约60分钟而生成。

7.权利要求1的方法，其中所述反刍动物DNA包含线粒体DNA序列。

8.权利要求7的方法，其中所述线粒体DNA序列编码选自细胞色素c、细胞色素b、 12S RNA、ATP酶亚基8、ATP酶亚基6、ATP合成酶、亚基8的一员，及其亚序列， 及其组合。

9.权利要求8的方法，其中所述线粒体DNA序列编码细胞色素b或其亚序列。

10.权利要求1的方法，其中所述第一反刍动物特异性引物和所述第二反刍动物特 异性引物选自：SEQ ID NO:1和2、SEQ ID NO:3和4与SEQ ID NO:11和12。

11.权利要求1的方法，还包括检测所述扩增的反刍动物DNA。

12.权利要求11的方法，其中检测所述扩增的反刍动物DNA包括检测荧光信号。

13.权利要求11的方法，其中检测所述扩增的反刍动物DNA包括使所述扩增的反 刍动物DNA与寡核苷酸探针接触。

14.权利要求13的方法，其中所述反刍动物DNA用包含SEQ ID NO:11和12所示 序列的第一反刍动物特异性引物和第二反刍动物特异性引物扩增，检测所述扩增的 反刍动物DNA包括使扩增的反刍动物DNA与包含SEQ ID NO:13和14所示序列的 寡核苷酸探针接触。

15.权利要求1的方法，还包括用第三反刍动物特异性引物和第四反刍动物特异性 引物扩增所述扩增的反刍动物DNA，从而生成第二种扩增的反刍动物DNA。

16.权利要求15的方法，还包括检测所述第二种扩增的反刍动物DNA。

17.权利要求1的方法，其中所述样品是选自动物饲料、动物饲料成分、化妆品、 营养保健品、疫苗、胶体灌输液的一员，或其组合。

18.权利要求1的方法，其中所述样品是动物饲料。

19.权利要求18的方法，其中所述动物饲料是牛饲料。

20.权利要求19的方法，其中所述牛饲料包含约0.5％-约30％牛油。

21.权利要求19的方法，其中所述牛饲料包含约1％牛油。

22.权利要求1的方法，其中所述样品是动物饲料成分。

23.权利要求22的方法，其中所述动物饲料成分是牛脂。

24.扩增反刍动物DNA的试剂盒，所述试剂盒包含：

第一对反刍动物特异性引物；

RNA酶；和

使用说明。