[发明专利]用滚环扩增法扩增多核苷酸

权利要求书

1.一种扩增和检测靶核酸分子的方法，该方法包括：

a)在靶核酸分子上连接第一接头核酸分子或第二接头核酸分子或第 一接头和第二接头核酸分子的组合；

b)环化靶核酸分子；

c)扩增该环化的核酸分子产生重复的核酸序列。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述环化用选自以下组的方法进 行：平端连接、退火相互补的两端然后连接、互补区域之间的连接、自身引 发连接、化学反应和光反应。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述靶核酸分子选自：mRNA， rRNA，RNAi，异核RNA，基因组DNA和cDNA。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第一接头核酸分子用选自以 下组的方法进行连接：连接、杂交连接、杂交然后聚合酶延伸、酶反应、化 学反应和光反应。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第一接头核酸分子还含有选 自以下组的序列：检测序列、位点特异性重组序列、同源重组序列、限制性 内切酶序列、启动子序列、转录终止序列、核糖体结合序列、核酶序列、复 制起始序列、基因序列和发夹环序列。

6.根据权利要求1所述的方法，还包括在环化前连接第二接头核酸分子。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第二接头核酸分子用选自以 下组的方法进行连接：连接、杂交连接、杂交然后聚合酶延伸、酶反应、化 学反应和光反应。

8.根据权利要求6所述的方法，其中，所述第二接头核酸分子还含有选 自以下组的序列：检测序列、位点特异性重组序列、同源重组序列、限制性 内切酶序列、启动子序列、转录终止序列、核糖体结合序列、核酶序列、复 制起始序列、基因序列和发夹环序列。

9.根据权利要求1所述的方法，其中，所述第一接头或第二接头核酸分 子通过核酸的随机杂交和短暂延伸而连接。

10.根据权利要求1所述的方法，其中，所述扩增包括加入至少一种引 物。

11.根据权利要求1所述的方法，其中，所述扩增是在不加入引物的情 况下进行的。

12.根据权利要求10所述的方法，其中，所述引物在其3’端还包含随 机序列。

13.根据权利要求12所述的方法，其中，所述引物还包含启动子序列。

14.根据权利要求10所述的方法，其中，所述引物是RNA：DNA嵌合 体。

15.根据权利要求14所述的方法，其中，所述引物还包含启动子序列。

16.根据权利要求1所述的方法，其中，所述环化的靶核酸分子包含蛋 白质表达序列。

17.一种检测靶核酸分子的方法，该方法包括：

a)在样品中加入环形核酸分子，其中所述环形核酸分子包含能与该靶 核酸分子至少一部分杂交的第一核酸序列；

b)使环形核酸分子与靶核酸分子的该部分杂交；和

c)通过与所述靶核酸分子中至少一个游离3’端聚合合成至少一种新 的核酸，其至少与环形核酸的第二部分相互补，其中，所述至少一个 游离3’端产生在靶核酸分子上能与第一核酸序列杂交的部分。

18.根据权利要求17所述的方法，其中，所述靶核酸分子选自：mRNA、 rRNA、RNAi、异核RNA、基因组DNA和cDNA。

19.根据权利要求17所述的方法，其中，所述游离3’端在引物与靶核 酸杂交之前产生。

20.根据权利要求17所述的方法，其中，所述游离3’端在引物与靶核 酸杂交之后产生。