[发明专利]一种bFGF－PLGA缓释微球及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)的缓释微球。其制备方法为w/o/w复乳-干燥法，用高分子材料PLGA为载体材料包封bFGF，在机械搅拌作用下制备出该缓释bFGF微球。

背景技术

碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)不仅是分裂素，而且是体内已知的作用最强的促血管生长因子。作为广谱的分裂素，bFGF可促进间质细胞、前成骨细胞、成骨细胞、软骨细胞、雪旺细胞和成纤维细胞等多种细胞增殖和分化。已有研究表明外源性bFGF能够促进多种细胞分裂和趋化，诱导胚胎正常发育，促进血管生长、创面愈合和神经再生及功能恢复。

由于bFGF在体内的半衰期为3-5分钟，全身应用将被快速灭活难以发挥其有效作用，局部穿刺分次给药也难以产生有效作用，并且增加患者的痛苦和经济负担，所以不能满足实验和临床应用的需要。因此，研究既能长期缓释bFGF又能保持其生物活性的缓释制剂具有重要意义。其中，微球技术是研究较少的一种缓释bFGF的方法。国外研究应用溶剂扩散法制成bFGF的EVAc缓释微球后，其生物活性丧失99％，而海藻酸盐缓释微球虽能保持81％的bFGF的生物活性，但其缓释期为2-12天。用于包封bFGF的载体材料可分为天然、半合成和合成的高分子材料。近年来，合成高分子材料因其生物相容性良好，可生物降解吸收，在体内较稳定，降解期可调控等优点而受到广泛重视，是一种理想的微球制备材料。Camarata应用溶剂-非溶剂法制成PLGA的神经生长因子缓释微球，其中丙交酯∶乙交酯＝70∶30，微球的降解期，体外为5周，体内为4.5周。若将丙交酯与乙交酯的比例调节为85∶15，则微球的降解期在体内可达三个月。Maysinger将30％的聚乳酸和70％聚羟基乙酸混合形成聚乳酸—聚羟基乙酸共聚物(Polylactic acid-polyglycolic，acid，PLGA)后应用乳液分散溶剂蒸发法制成纤毛神经营养因子的缓释微球，在24天内能缓释有效的药物浓度。但是经查阅文献，目前国内尚无bFGF微球及其相关实验研究的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以PLGA为基质材料，表面光滑圆整，颗粒规则无粘连，粒径在10μm下可控，载药量和包封率高，缓释期在2周以上，可用于关节间隙、骨折和骨缺损等局部给药或静脉给药的缓释微球及其制备方法。

本发明的技术方案为：应用w/o/w复乳-干燥法，将基质材料溶于有机溶剂中制成油相，取适量bFGF逐滴加入上述油相中，将其匀化后形成初乳；将此乳液滴加入水相分散介质溶液中，充分匀化，室温下磁力搅拌3-5小时，即得bFGF-PLGA-Ms胶体溶液；在bFGF-PLGA-Ms胶体溶液中加入适量的支架剂，常规冻干保存。

本发明微球基质材料选用PLGA，其分子量为4.0×10³-5.5×10⁴，PLA∶PGA质量百分比为10∶90-50∶50，并且其分子量为4.0×10³-5.5×10⁴。有机溶剂为二氯甲烷(DCM)或二氯甲烷(DCM)和丙酮(AC)的混合液，DCM和AC的体积百分比为75-100∶0-35。

本发明水相分散介质PVA的水解度为87-90％，聚合链节数为1700-1750，重均分子量为1.0-2.0×10⁴，浓度为1-7％；或水相分散介质为PVA-PEG混合水溶液，溶液浓度为4-10％，PVA与PEG的质量百分比为40-70∶30-60 。

本发明采用普通电磁搅拌器，其搅拌速度为600-1200RPM，旋涡混合速度选择中速为宜。制备微球的匀化方式包括旋涡混合和超声，每次超声5-10s左右，每次旋涡混合时间3-5min左右。

本发明制备微球内水相体积可在50-300μl之间；外水相中无机盐的浓度可在0-2.0g/100ml，也可适当增加。冻干微球之前，加入支架剂包括葡萄糖、乳糖或甘露醇等，其含量为1-5％。

采用本发明方法所制备微球表面光滑圆整，颗粒规则无粘连(图1，图2)，粒径在10μm下可控(图3)，载药量和包封率高，缓释期在2周以上，其体外释药曲线较为光滑平坦(图4)，可用于关节间隙、骨折和骨缺损等局部给药或静脉给药。