[发明专利]草原疯草毒素疫苗

权利要求书

1.一种草原疯草毒素疫苗，其特征在于，首先将溴乙酸与N-羟基琥珀酰亚胺反应成活性酯，再与苦马豆素合成为N-羧甲基苦马豆素，最后与牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)缩合成为SW-BSA，透析后冰冻干燥，完全福氏佐剂乳化即为SW疫苗。

2.根据权利要求1所述的草原疯草毒素疫苗，其特征在于，具体制备按以下步骤进行：

第一步，SW—活性酯(季铵盐)的合成：

反应式

操作程序为：取SW 17.3mg～173mg(0.1mmol～1mmol)在干燥的丙酮液中完全溶解后，加入用溴乙酸制备的活性酯23.6mg～236mg(0.1mmol～1mmol)，80±5℃搅拌回流反应9±0.5h，过滤，丙酮洗涤，五氧化二磷真空干燥。计算产率。MP、IR、元素分析鉴定；

第二步，SW—BSA的合成：

反应式

操作程序为：取晶状BSA 167.5mg～1675mg(0.0025mmol～0.025mmol)，完全溶于4～20mL蒸馏水后，加入制备的季铵盐40.9mg～409mg(0.1mmol～1mmol)，冰浴搅拌反应18±0.5h。测定结合率后反应产物装入透析袋中，蒸馏水中透析24±0.5h，中间更换3次蒸馏水。冻干透析袋中共轭物。计算产率。

第三步，SW—BSA的结合率计算：

分别按季铵盐与BSA(牛血清白蛋白)80∶1、60∶1、40∶1、20∶1和10∶1摩尔比12±0.5h完成合成反应，产物经p-Amino Benzmidine-4B凝胶(LKB)过柱分离(柱体积25cm³；上样量每次0.7mL；蒸馏水洗脱，洗脱速度0.2mL/cm².min)，得到合成物、未反应的BSA及未反应的季铵盐，并分别进行定量分析。

第四步，完全福氏佐剂乳化合成物，冻干得到SW-BSA疫苗。

3.根据权利要求1所述的草原疯草毒素疫苗，其特征在于，具体制备按以下步骤进行：

第一步，SW—活性酯(季铵盐)的合成：

反应式

操作程序为：取SW 17.3mg(0.1mmol)在干燥的丙酮液中完全溶解后，加入用溴乙酸制备的活性酯23.6mg(0.1mmol)，80℃搅拌回流反应9h，过滤，丙酮洗涤，五氧化二磷真空干燥，计算产率，MP、IR、元素分析鉴定。

第二步，SW—BSA的合成：

反应式

操作程序为：取晶状BSA 167.5mg(0.0025mmol)，完全溶于4mL蒸馏水后，加入制备的季铵盐40.9mg(0.1mmol)，冰浴搅拌反应18h。测定结合率后反应产物装入透析袋中，蒸馏水中透析24h，中间更换3次蒸馏水；冻干透析袋中共轭物；计算产率。

第三步，SW—BSA的结合率计算：

分别按季铵盐与BSA(牛血清白蛋白)80∶1、60∶1、40∶1、20∶1和10∶1摩尔比12h完成合成反应，产物经p-Amino Benzmidine-4B凝胶(LKB)过柱分离(柱体积25cm³；上样量每次0.7mL；蒸馏水洗脱，洗脱速度0.2mL/cm².min)，得到合成物、未反应的BSA及未反应的季铵盐，并分别进行定量分析；

第四步，完全福氏佐剂乳化合成物，冻干得到SW-BSA疫苗。