[发明专利]人环指蛋白酶编码序列、其制备方法及用途

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及一种新的人基因核苷酸序列。更具体地说，本发明涉及人环指蛋白酶的cDNA序列以及该序列编码的多肽。本发明还涉及所述多核苷酸序列和所述多肽的生产方法，以及这些多核苷酸和所述多肽的用途。

背景技术

锌指基因家族是最大的人类基因家族之一，其蛋白产物主要通过与DNA相互作用而起转录因子作用，调节靶基因的表达以适应生物体发育、分化、成熟过程的需要。锌指蛋白不仅与造血密切相关，影响着红细胞系、巨核细胞系和淋巴细胞系(如GATA家族和EKLF)、粒细胞系(MZF1)、单核细胞系(Egr-1)等发育、分化过程，而且还与一些造血系统恶性肿瘤有关，如PLZF在急性早幼粒细胞性白血病发病中起重要作用。

环指(RING finger)是一个由40-60个氨基酸残基构成的特定的锌指结构，它与两个锌原子结合，可能参与调节蛋白之间的相互作用。有两种变异体，C3HC4和C3H2C3型，与不同类型的半胱氨酸/组氨酸都有一定关系，其中的组氨酸结构还被称作“环指-H2”结构。已知在某些环指的三维结构中，锌原子的连接系统对于环指结构是独一无二的，又被称为“交叉支撑”结构。“交叉支撑”结构与两个锌原子结合的方式可用下表表示：

其中，“C”表示与锌原子结合时保守的半胱氨酸/残基的位置，“H”表示与锌原子结合时保守的组氨酸/残基的位置，“Zn”表示锌原子的位置。

最近研究结果显示，环指蛋白对某些蛋白具有特异作用，可能所有的环指蛋白都与E3泛素蛋白连接酶的作用有关(Freemont PS，2000，Curr Biol 10(2)：R84-7)。泛素的作用在于降解靶蛋白，是细胞蛋白功能的潜在调控者。及时剔除使细胞恶性增殖的蛋白对于保持生物体的正常生理活动是非常重要的。然而在这种蛋白被清除前，必须给他们加上一种被称为泛素的蛋白标识物黏附。最近研究发现，环指分子结构有助于泛素的黏附。目前，已在200多种蛋白中发现了环指结构(Marcia Barinaga，1999，286(5438)：223)。然而，本发明的hPA1尚未被公开或发表过。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种新的蛋白酶家族成员，该蛋白被命名为人环指蛋白酶相关蛋白(human protease associated protein 1，hPA1)。

本发明的另一个目的是提供一种新的多核苷酸，该多核苷酸编码蛋白酶家族的一个新成员，本发明的核苷酸被命名为hPA1。

本发明的再一个目的是提供一种利用重组技术生产所述的人hPA1的方法。

本发明还提供了hPA1基因序列和多肽的应用。

在本发明的一个方面，提供了一种分离出的DNA分子，它包括：编码具有人hPA1蛋白活性的多肽的核苷酸序列，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.1中从核苷酸237-1364位的核苷酸序列有至少90％的同源性；或者所述的核苷酸序列能在中度严紧条件下与SEQ ID NO.1中从核苷酸237-1364位的核苷酸序列杂交。较佳地，所述的序列编码一多肽，该多肽具有SEQ ID NO.2所示的序列。更佳地，该序列具有SEQ ID NO.1中从237-1364位的核苷酸序列。

在本发明的另一方面，提供了一种分离的hPA1蛋白多肽，它包括：具有SEQ ID NO.2氨基酸序列的多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ IDNO.2序列的多肽。

在本发明的另一方面，提供了一种载体，它含有上述分离出的DNA。

在本发明的另一方面，提供了一种所述载体转化的宿主细胞。

在本发明的另一方面，提供了一种产生具有hPA1蛋白活性的多肽的方法，该方法包括：

(a)将编码具有hPA1蛋白活性的多肽的核苷酸序列可操作地连于表达调控序列，形成hPA1蛋白表达载体，所述的核苷酸序列与SEQ ID NO.1中从核苷酸237-1364位的核苷酸序列有至少90％的同源性；

(b)将步骤(a)中的表达载体转入宿主细胞，形成hPA1蛋白的重组细胞；

(c)在适合表达hPA1蛋白多肽的条件下，培养步骤(b)中的重组细胞；

(d)分离出具有hPA1蛋白活性的多肽。

在本发明的一个具体实施方案中，本发明的分离的多核苷酸全长为2013个核苷酸，其详细序列见SEQ ID NO.1，其中开放读框位于237-1364位核苷酸。