[发明专利]免疫性脂质体治疗性乙肝疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种乙肝疫苗，具体是指一种免疫性脂质体治疗性乙肝疫苗，同时本发明也涉及这种疫苗的制备方法。

背景技术

乙型病毒性肝炎是世界上广泛流行的传染病之一，严重地威胁人类的健康。慢性乙肝患者和HBV病毒携带者是主要传染源。目前人们对乙型病毒性肝炎主要采取预防手段，即接种乙型肝炎疫苗进行预防。预防疫苗主要用于从未感染过的机体，因此天然结构的病毒蛋白可直接作为疫苗抗原。但是已经开发出应用的乙型肝炎病毒疫苗，虽然能对HBV感染起到良好的预防作用，但对感染HBV的机体，却难以发挥治疗和清除病毒的作用。主要原因在于机体对乙肝病毒产生了特异性免疫耐受，免疫系统不能有效地清除病毒。对乙型病毒肝炎的病毒携带者，或感染者，尤其是慢性乙肝病毒肝炎这样的感染过的患者，目前尚无有效的治疗药物及手段。因此，研制既能对HBV起到良好的预防作用，又能对HBV感染引起的相关疾病发挥治疗作用的治疗性乙肝疫苗成了国内外研究的热点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种免疫性脂质体治疗性乙肝疫苗，它是包含乙肝表面抗原的脂质体，它也可以包括或不包括免疫调节分子，它既能对HBV感染引起的乙型肝炎发挥有效的治疗作用，又能对HBV再感染起到良好的预防作用。

本发明的另一目的是提供一种免疫性脂质体治疗性乙肝疫苗的制备方法。

为达上述目的本发明采用的技术方案是，将脂质体作为载体和佐剂，与乙肝表面抗原结合在一起制备成的一种免疫性脂质体治疗性乙肝疫苗，这种疫苗既能激发机体体液免疫反应，产生保护性抗体，清除血循环中的病毒，又能激发CTL的活性，产生很强的细胞免疫反应，消灭肝细胞内的病毒，从而达到彻底清除病毒，治疗慢性乙肝和乙肝病毒携带者。

该疫苗可以加免疫调节剂，如胸腺肽、白细胞介素-2、LAK细胞、免疫核糖核酸、特异性转移因子、肝炎灵、猪苓多糖、香菇菌多糖、云苓、辅酶Q10、左旋咪唑、脂质A、MPL、QuilA、BCG等。也可以不加免疫增强剂。

本发明的特征是所述的免疫脂质体治疗性乙肝疫苗中可以加入维生素E等抗氧化剂，加入负电荷磷脂，防止脂质体凝聚、融合，改变剂型，制备冻干剂，避免渗漏，延长脂质体保存时间。

本发明所述的乙肝表面抗原包括S，S+前S1，前S1+前S2，S+前S2，S+前S1+前S2中的任一种。

本发明优选的乙肝表面抗原包括S+前S2、S+前S1+前S2，本发明最佳的乙肝表面抗原是S+前S1+前S2。

本发明免疫脂质体治疗性乙肝疫苗单位剂量中含乙肝表面抗原的量是：1-80微克。

本发明免疫脂质体治疗性乙肝疫苗单位剂量中含乙肝表面抗原的优选量是：20-30微克。

本发明所涉及的脂质体是由磷脂、非磷脂、固醇类及它们的衍生物和膜材组成。目前用于制备脂质体的有卵磷脂、豆磷脂，磷脂酰乙醇胺、胆固醇、脑磷脂、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、胆固醇乙酰脂质体、B-谷甾醇、牛胆酸钠、蛋磷脂酰胆碱、二棕榈酰-DL-a磷脂酰胆碱、磷脂酰丝胺酸、磷脂酰肌醇、神经鞘磷脂、鞘髓磷脂、二鲸蜡磷酸酯、二肉豆蔻卵磷脂、硬脂酰胺、二氧乙烯十六烷基醚和四氧乙烯十二烷基醚等均可用于本发明。

本发明所涉及的膜材包括但不限于胆固醇、十八胺、磷脂酸等。胆固醇可以调节双分子层流动性、通透性等，十八胺、磷脂酸可以改变脂质体表面电荷性质。

本发明优选的脂质体球径为20～5000nm，本发明较优选的脂质体球径是100～200nm和950-1050nm。

本发明免疫脂质体治疗性乙肝疫苗单位剂量中含脂质体量0.3-1.5ml。

本发明免疫脂质体治疗性乙肝疫苗单位剂量中含脂质体优选的量是0.5-1.0ml。

脂质体的制备工艺是本领域的技术人员所熟知的，其基本原理都是将油性材料与水性防料经过适当处理后形成油包水的制剂，但包裹物质的性质可能具有较大的差别，如化学合成物质，有机物质；生物物质如蛋白、多肽及核酸等。后者在处理过程中较易受到制备条件的影响，如温度、时间、振荡及酸碱度等因素的影响。治疗性乙肝疫苗属于生物制剂中的多肽。常规的脂质体制备方法，象薄膜法、逆相蒸发法、加压挤出法、熔融法及冻干水化法或改进均可用于本发明制备免疫脂质体治疗性乙肝疫苗。

本发明免疫性脂质体治疗性乙肝疫苗的优选的制备工艺是逆相蒸发法、冻干水化法。本发明最优选的脂质体的制备工艺是冻干水化法。

本发明免疫性脂质体治疗性乙肝疫苗的冻干水化法制备工艺包括如下步骤：