[发明专利]抗乙肝病毒表面抗原S的人源化抗体及其制备方法

说明书

                        发明领域

本发明涉及抗乙肝病毒表面抗原S的人源化抗体及其制备方法。具体地说，它涉及这样一种人源化抗体，它包括在其可变区的HCDR1，HCDR2，HCDR3和LCDR1，LCDR2，LCDR3上具有来源于人抗体的氨基酸序列的重链和轻链，通过从上述人源化抗体的重链删除结合MHC II类分子的肽序列而使人抗-小鼠抗体(HAMA)的应答最小化，它还涉及含有上述人源化抗体的各个重链和轻链基因的表达载体，通过用重链和轻链表达载体转染的能够产生人源化抗体的转化体，以及通过培养上述转化体大规模生产人源化抗体的方法。

                        发明背景

乙肝病毒(HBV)侵入人体，导致慢性和急性肝炎。如果情况更糟的话，它可能是一种导致肝硬化和肝癌的病原。据估计全世界高达三亿患者感染HBV(Tiollais和Buendia，Sci.Am.，264，48，1991)。HBV的包膜由三种蛋白质组成。具体地说，它由包括S抗原的主要蛋白质、包括S抗原和前S2抗原的中间蛋白质、以及包括S抗原、前S2抗原和前S1抗原的大蛋白质组成(Neurath，A.R.和Kent，S.B.H.，Adv.Vir.Res.，34：65-142，1988)。上述所有的HBV表面抗原蛋白质均能够诱导中和HBV的抗体。其中，S抗原占总包膜蛋白的约80％，并且具有通常在所有HBV亚型中都存在的称之为“共有a”的中和表位。

当HBV感染时，例如，HBV阳性母亲生产的新生儿或接触HBV的医学研究所的职员或接受HBV相关肝病患者的肝移植的接受者情况下，已用HB免疫球蛋白(HBIG)预防HBV感染(Beasley等，Lancet，2，1099，1983；Todo等，Hepatol.，13，619，1991)。然而，目前使用的HBIG由人血浆制备，因此存在抗抗原的特异性低和污染的可能性相对较高的缺点。而且，必须连续提供人血。

为了克服这些缺点，已经研制出应用抗HBV表面抗原的小鼠单克隆抗体的方法。通常，小鼠单克隆抗体具有对抗原高度亲和和能够大规模生产的优点，但是，它也具有这样的缺点，即当施用到人体中时会在人体中产生人抗小鼠抗体的应答(在下文中，称之为“HAMA应答”)(Shawler等，J.Immunol.，135，1530，1985)。

为了克服这些缺点，已经研制出人源化抗体，其中小鼠单克隆抗体的高亲和性和特异性被维持，而HAMA应答被降至最低。通过基因工程方法将小鼠单克隆抗体的互补决定簇(下文称之为“CDRs”)移植到人抗体的构架区构建人源化抗体。已经报道这种人源化抗体在人体中表现小得多的免疫原性(Riechmann等，Nature，332，323，1988；Nakatani等，Protein Engineering，7，435，1994)。然而，据报道，这种方法产生的人源化抗体也有缺点，即当反复给人体施用时，则抗体中来源于小鼠的CDRs能够引起免疫应答(Stephens等，Immunology，85，668-674，1995；Sharkey等，CancerResearch，55，5935s-5945s，1995)。因此，期望当人源化抗体中来源于小鼠抗体的CDRs的氨基酸残基被取代为人抗体的残基时，HAMA应答将被降低。

在抗体分子的可变区中有3个重链CDR环-HCDR1，HCDR2和HCDR3-和3个轻链CDR环-LCDR1，LCDR2和LCDR3。为了用本领域上述方法生产人源化抗体，移植了全部6个CDR环。然而，因为CDR中并不是所有残基都直接结合抗原(Padlan等，FASEB J.，9，133，1995)，所以通过将直接涉及抗原结合的小鼠单克隆抗体的特异性决定残基(下文称之为“SDRs”)移植到人抗体的构架区而构建的人源化抗体将产生比已知的人源化抗体更低的HAMA应答。