[发明专利]对人肿瘤坏死因子α具有特异性的抗体分子及其用途

说明书

本发明涉及一种对人肿瘤坏死因子α(TNFα)的抗原决定簇具有特异性的抗体分子。本发明还涉及该抗体分子的治疗用途，及生产该抗体分子的方法。

本发明涉及抗体分子。在抗体分子中，有两个重链和两个轻链。各重链和各轻链的N-端均有一个可变域。各个可变域是由四个构架区(FRs)组成的，该构架区与三个互补性决定区(CDRs)相交替。可变域中的残基通常是根据Kabat等人设计的系统编号的。此系统是在Kabat等，1987，Sequences of Proteins of Immunological Interest，US Department of Health and Human Services，NIH，USA(此后称为“Kabat等(supra)”)中提出的。除非另有说明，否则将该编号系统用于本发明的说明书中。

Kabat残基的命名并非总是与线性氨基酸残基的编号直接相关。与严格的Kabat编号方式相比，相应于缩短，或插入基本可变域结构的结构性组分，构架或CDR，实际的线性氨基酸序列可包括较少的或附加的氨基酸。通过与具有“标准”Kabat编号序列抗体中的同系物的残基进行序列对比，可确定所提供抗体残基正确的Kabat编号。

根据Kabat编号方式，重链可变域的CDRs位于第31-35位(CDRH1)，50-65(CDRH2)位和95-102位(CDRH3)的残基上。

根据Kabat编号方式，轻链可变域的CDRs位于第24-34位(CDRL1)，50-56位(CDRL2)和89-97位(CDRL3)残基上。

欧洲专利申请EP-A-0239400中描述了移植了CDR的抗体的结构，该文献还公开了一种方法，其中使用长链的寡核苷酸，通过定点诱变，把小鼠单克隆抗体的CDR移植到人免疫球蛋白可变域的构架区上。该CDR可确定抗体的抗原结合特异性，且其是携带在可变域构架区上相对较短的肽序列。

有关通过移植CDR而使单克隆抗体人源化的早期研究工作是在识别合成抗原，如NP的单克隆抗体上进行的。Verhoeyen等(Science，239，1534-1536，1988)和Riechmann等(Nature，332，323-324，1988)分别描述了通过CDR移植，使识别溶菌酶的小鼠单克隆抗体和识别人T-细胞上抗原的大鼠单克隆抗体人源化的实施例。

Riechmann等发现单独转移CDR(如Kabat(Kabat等(supra)和Wu等，J.Exp.Med.，132，211-250，1970)所定义的)不足以在移植了CDR的产物中提供令人满意的抗原结合活性。人们发现，不得不改变许多构架残基，以使它们与供体构架区的那些相对应。国际专利申请WO90/07861中描述了选择需改变的构架残基的草拟标准。

目前已公开了很多讨论移植了CDR的(CDR-grafted)抗体的评论，包括Vaughan等(Nature Biotechnology，16，535-539，1998)。

TNFα是一种促炎细胞因子，它通过免疫系统的细胞释放并与之相互作用。因而，TNFα是通过巨噬细胞释放的，其中的巨噬细胞已经被革兰氏阴性菌的脂多糖(LPS)活化。本身，TNFα是一种重要的内源介质，其涉及与细菌性脓毒症有关的内毒素性休克的发病和发展。TNFα还可以正向调节许多人类疾病，包括慢性疾病，如类风湿性关节炎，克罗恩氏病，溃疡性结膜炎和多发性硬化症。人TNFα的转基因鼠可产生组成型高水平的TNFα，并发展成一种自发的，有害的，类似类风湿性关节炎的多发型关节炎(Kaffer等，EMBO J.，10，4025-4031，1991)。因此将TNFα称为促炎细胞因子。