[发明专利]表达血管生成抑制因子的肿瘤细胞内增殖的病毒及其构建方法

权利要求书

1.一种能高效表达血管生成抑制因子的肿瘤细胞内特异性增殖的病毒，其特征在于将编码血管生成抑制因子的核苷酸序列插入肿瘤细胞内特异性增殖的病毒基因组中的非增殖必需区域，该病毒选择性地在肿瘤细胞内增殖，而在正常细胞内基本不增殖，通过病毒在肿瘤细胞内复制增殖，导致编码血管生成抑制因子的核苷酸序列拷贝数增加，从而血管生成抑制因子基因表达量增加，该肿瘤细胞内特异性增殖的病毒可以是以下任何一种：

(1)在肿瘤细胞内特异性增殖的野生型病毒；

(2)病毒增殖必需基因的转录起始点与编码起始位点之间插入肿瘤细胞特异性激活的顺式作用元件；

(3)蛋白功能缺失重组后能在肿瘤细胞内特异性增殖的病毒。

2.根据权利要求1所述能高效表达血管生成抑制因子的肿瘤细胞内特异性增殖的病毒的构建方法，其特征在于：

(1)将编码血管生成抑制因子的核苷酸序列直接插入肿瘤细胞内特异性增殖的病毒基因组中的非增殖必需区域；

(2)病毒增殖必需基因的转录起始点与编码起始位点之间插入肿瘤细胞特异性激活的顺式作用元件；顺式作用元件可以是下述任何一种：(a).甲胎蛋白增强子及启动子；(b).癌胚抗原增强子及启动子；(c).酪氨酸酶增强子及启动子；(d).ErbB2增强子及启动子；(e).ErbB3增强子及启动子；(f).ErbB4增强子及启动子；(g).DF3乳腺癌相关抗原增强子；(h).前列腺素特异性抗原增强子及启动子；(i).腺血管舒缓素增强子及启动子；(j).EB病毒中的Orip；(k).EB病毒Orip中的FR增强子；(1).EB病毒BamHI C-启动子；(m).EB病毒中的Orip联合EB病毒BamHI C-启动子；(n).EB病毒Orip中的FR联合单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基本启动子或SV40基本启动子；

(3)蛋白功能缺失重组后能在肿瘤细胞内特异性增殖的病毒；蛋白功能缺失可以是下述任何一种：腺病毒E1B 55Kda蛋白功能缺失，腺病毒E1B 19Kda蛋白功能缺失，腺病毒E1A蛋白功能缺失，单纯疱疹病毒ICP6蛋白功能缺失，单纯疱疹病毒ICP34.5蛋白功能缺失。

3.根据权利要求1所述的能高效表达血管生成抑制因子的肿瘤细胞内特异性增殖的病毒，其特征在于它由要病毒增殖必需基因的转录起始点与编码起始位点之间区域插入某种肿瘤细胞特异性激活的顺式作用元件构成，该种顺式作用元件可以是下述任何一种：甲胎蛋白增强子及启动子，癌胚抗原增强子及启动子，酪氨酸酶增强子及启动子，ErbB2增强子及启动子，ErbB3增强子及启动子，ErbB4增强子及启动子，DF3乳腺癌相关抗原增强子，前列腺素特异性抗原增强子及启动子，腺血管舒缓素增强子及启动子，EB病毒中的Orip，EB病毒Orip中的FR增强子，EB病毒BamHI C-启动子，EB病毒中的Orip联合EB病毒BamHI C-启动子，EB病毒Orip中的FR联合单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶基本启动子或SV40基本启动子，在EB病毒感染或潜伏感染细胞中特异性激活的顺式作用元件，病毒增殖必需基因为病毒早期基因。

4.根据权利要求3所述的能高效表达血管生成抑制因子的肿瘤细胞内特异性增殖的病毒，其特征在于所述病毒为腺病毒，该腺病毒增殖必需基因至少含有以下一个腺病毒的早期表达基因：E1A、E1B、E2、E4。

5.根据权利要求1所述的能高效表达血管生成抑制因子的肿瘤细胞内特异性增殖的病毒，其特征在于所述病毒是腺病毒时，该腺病毒E1B55Kda通过基因点突变、缺失突变及插入突变导致E1B55Kda蛋白功能缺失。

6.根据权利要求1所述的能高效表达血管生成抑制因子的肿瘤细胞内特异性增殖的病毒，其特征在于所述病毒是腺病毒时，该腺病毒E1B19Kda通过基因点突变、缺失突变及插入突变导致E1B19Kda蛋白功能缺失。

7.根据权利要求1所述的能高效表达血管生成抑制因子的肿瘤细胞内特异性增殖的病毒，其特征在于所述病毒是腺病毒时，该腺病毒E1A通过基因点突变、缺失突变及插入突变导致E1A蛋白功能缺失。