[发明专利]酯酶同工酶诊断试剂盒的制备

说明书

本发明涉及一种酯酶同工酶诊断试剂盒的制备，属于酶学领域。

近年来，酶学在临床诊断与治疗中的应用发展非常迅速，现已分别发展为医学中的两个新领域，即诊断酶学和治疗酶学。目前已有上百种酶试验可用于临床诊断。临床酶学的这一发展，部分是由于测定技术的发展，使许多酶的测定已日益精确和简便，可用于常规测定。部分是由于认识到某些疾病发展过程中酶活力必然发生改变这一客观事实，特别是在疾病的早期，用X光片、CT还未能发现病灶时，而体内的酶活性已开始发生变化。如果能定期查体，可做到对疾病的早期发现。值得一提的是，目前临床上诊断酶学的应用多数是对酶的总活性的测定，并且市场上已有相应试剂盒销售，其缺点是缺乏器官特异性。目前有关酶活性测定的试剂盒约有20～30种，同工酶检测试剂盒约有3～5种，但多数用的是化学抑制法或免疫抑制法。而同工酶是指酶蛋白结构不同而具有相同的催化特性的一类酶，不同的同工酶来自不同的组织和细胞。当某一组织或器官发生病变时，由于组织受损或细胞膜通透性的变化，引起细胞内酶大量释入血液而引起血清酶活性的改变。通过同工酶的检测可确定患病部位，从而提高酶学诊断的特异性和敏感性，还可判断预后。目前由于自行配制酶显示液，因所用试剂品种繁多，规格不一，致使酶显示结果不稳定，结果判定不统一，且同工酶检测操作较繁琐，费时等等，特别是大型生化分析仪的应用，使临床生化检测的操作更简便，省时、省力，但其是对总酶活性的测定，缺乏组织特异性，相比较，同工酶的检测使病变早期定性和定位就精确的多了。

本发明的目的在于提供一种质量优良、性能稳定、重复性能好，同时大大简化了检测的操作过程且使用该试剂盒可使同工酶的检测操作规范化，从而使酶活性的检测及质量控制达到统一标准的酯酶同工酶诊断试剂盒的制备。

本发明的目的由如下技术方案实施：

做醋酸纤维素薄膜电泳时，其包括有：(1)、配制浓度为0.03mol/L-0.1mol/L电极液，PH为7.5-9.0；(2)、配制浓度为0.05mol/L-0.2mol/L泡电泳膜缓冲液，分装安瓿A；(3)、将冰乙酸做为固定液分装安瓿G，用时加水稀释；(4)、显色液的配制：(a)、将底物分装安瓿B；(b)、溶剂分装安瓿C；(c)、将浓度为0.05～0.25mol/L缓冲液分装安瓿D；(d)、将重氮盐染料分装安瓿E；(e)、将琼脂糖分装安瓿F；

其中将所述安瓿B内的底物、安瓿E内的重氮盐染料、安瓿F内的琼脂糖按重量百分比，其所占比例分别是14.4％-83.3％，12.8％-85.4％，1.5％-28.6％；按上述比例，用时先将安瓿B内的底物、10～30微升安瓿C内的溶剂混合，然后将安瓿D内1～2.5ml浓度为0.05～0.25mol/L的缓冲液和安瓿E内的重氮盐染料混合溶解，将安瓿F内的琼脂糖加水加热溶解，然后将安瓿B内的底物和安瓿C内的溶剂的混合液，安瓿D内的缓冲液和安瓿E内的重氮盐染料的混合液、安瓿F内的琼脂糖溶解后混合，即为显色液。

做琼脂糖凝胶电泳时，其包括有：(1)、配制浓度为0.03mol/L-0.1mol/L电极液，PH为7.5-9.0；(2)、将冰乙酸做为固定液分装安瓿G，用时加水稀释；(3)、配制琼脂凝胶：

将琼脂糖或琼脂、泡电泳膜缓冲液、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮分装安瓿A，其中琼脂糖或琼脂、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮(按重量百分比)其比例分别为19.2％-38.3％，43.5％-77.0％，3.8％-23.0％，泡电泳膜缓冲液是80～120ml的浓度为0.05mol/L-0.2mol/L缓冲液，将琼脂糖或琼脂、泡电泳膜缓冲液、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮加热溶解，趁热分装，制备为安瓿A；(4)、显色液的配制：

(a)、将底物分装安瓿B；

(b)、溶剂分装安瓿C；

(c)、将浓度为0.05～0.25mol/L缓冲液分装安瓿D，

(d)、将重氮盐染料分装安瓿E；

其中将所述安瓿B内的底物、安瓿E内的重氮盐染料，按重量百分比，所占比例分别是12.5％-85.7％，14.3％-87.5％；用时将安瓿B内的底物加入10～30微升安瓿C内的溶剂，安瓿E内的重氮盐染料加入1～2.5ml安瓿D内浓度为0.05～0.25mol/L的缓冲液，再将安瓿B和安瓿C内容物的混合液和安瓿E与安瓿D内容物的混合液混合，即为显色液。

所述琼脂凝胶是将琼脂糖或琼脂、浓度为0.05mol/L-0.2mol/L泡电泳膜缓冲液分装安瓿A，其中所述琼脂糖或琼脂0.5g～1g，加入80～120ml的缓冲液，加热溶解，趁热分装。