[发明专利]编码dapC基因的核苷酸序列及生产L－赖氨酸的方法

权利要求书

1、分离的多核苷酸，其包含选自如下一组的一个多核苷酸序列：

a)与编码包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的多肽的多核苷酸至少70％相同的多核苷酸，

b)编码包含与SEQ ID NO:2的氨基酸序列至少70％相同的氨基酸序列的多肽的多核苷酸，

c)与a)或b)的多核苷酸互补的多核苷酸，以及

d)包含a),b)或c)的多核苷酸序列的至少15个连续核苷酸的多核苷酸。

2、权利要求1的多核苷酸，其中多核苷酸是能在棒状细菌中复制的优选地是重组的DNA。

3、权利要求1的多核苷酸，其中该多核苷酸是RNA。

4、权利要求1的多核苷酸，包含如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。

5、权利要求2的可复制的DNA，包含

(ⅰ)如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，或

(ⅱ)在遗传密码简并范围内相应于的(ⅰ)序列的至少一个序列，或

(ⅲ)与互补于(ⅰ)或(ⅱ)序列的序列杂交的至少一个序列，和任选地

(ⅳ)(ⅰ)中中性功能的有义突变。

6、含有权利要求1的多核苷酸的载体，特别是pXT-dapCexp，其特征在于具有图2所示限制图谱，以在谷氨酸棒杆菌中的形式保藏，保藏号DSM13254。

7、作为宿主细胞的含有权利要求6的载体的或其中zwal基因是增强的棒状细菌。

8、制各L-氨基酸特别是L-赖氨酸的方法，其中进行以下步骤：

(a)发酵产生所需的L-氨基酸的细菌，该细菌中至少dapC基因是增强的，

(b)在培养基或细菌细胞中积累所需产物，及

(c)分离所需的L-氨基酸。

9、权利要求8的方法，其中使用这样的细菌，该细菌中所需L-氨基酸生物合成途径的其他基因是是额外增强的。

10、权利要求8的方法，其中使用这样的细菌，该细菌中降低L-赖氨酸形成的代谢途径至少被部分抑制。

11、权利要求8-12任一项所述的方法，其中使用产生L-赖氨酸的棒状细菌。

12、权利要求8的方法，其中发酵这样的细菌制备L-赖氨酸，所述细菌中除了dapC基因，选自如下一组的一或多个基因也同时增强，特别是过表达或扩增：

12.1编码抗反馈天冬氨酸激酶的lysC基因，

12.2编码天冬氨酸半醛脱氢酶的asd基因，

12.3编码二氢-2,6-吡啶二羧酸合酶的dapA基因，

12.4编码二氢-2,6-吡啶二羧酸还原酶的dapB基因，

12.5编码四氢吡啶二羧酸琥珀酰化酶的dapD基因，

12.6编码N-琥珀酰二氨基庚二酸脱琥珀酰化酶的dapE基因，

12.7编码二氨基庚二酸差向异构酶的dapF基因，

12.8编码二氨基庚二酸脱羧酶的lysA基因，

12.9编码二氨基庚二酸脱氢酶的ddh基因，

12.10编码赖氨酸输出蛋白的lysE基因，

12.11编码丙酮酸羧化酶的pyc基因，

12.12编码苹果酸：醌氧化还原酶的mqo基因，

12.13zwal基因，

12.14编码谷氨酸脱氢酶的gdh基因。

13、权利要求8的方法，其中发酵这样的细菌制备L-赖氨酸，所述细菌中选自如下一组的一或多个基因同时弱化：

13.1编码烯醇丙酮酸磷酸羧激酶的pck基因，

13.2编码葡萄糖-6-磷酸异构酶的pgi基因，

13.3编码丙酮酸氧化酶的poxB基因，或

13.4 zwa2基因，或

13.5编码琥珀酰辅酶A合成酶的sucC或sucD基因。

14、前述任一项权利要求的方法，其中使用谷氨酸棒杆菌。

15、权利要求1的多核苷酸序列作为作为杂交探针分离编码dapC基因的产物的cDNA的应用。

16、权利要求1的多核苷酸序列作为杂交探针分离与dapC基因具有高水平相似性的cDNA或基因的应用。