[发明专利]桂竹香外源基因转移到桑树体内的制备方法

权利要求书

1.一种桂竹香外膜蛋白基因转移到桑树体内的制备方法，包括下列步骤：

A.构建双元载体系统；

B.构建受体系统；

C.目的基因的转化；

D.外植体脱菌；

E.选择培养；

F.外源基因整合。

2.根据权利要求1所述的一种桂竹香外膜蛋白基因转移到桑树体内的制备方法，其特征在于构建双元载体系统，通过反式激活T-DNA转移，双元载体系统包括两个Ti质粒：即mini-Ti和Helper-Ti。

3.根据权利要求2所述的一种桂竹香外膜蛋白基因转移到桑树体内的制备方法，其特征是mini-Ti质粒来自pTiT37的T_DNA边界序列，在两个边界序列之间的T_DNA区含有植物选择标记和启动子的Nos-Npt-II，以及来自噬菌体M13mp19的多种酶连接接头的Lacz基因。

4.根据权利要求1所述的一种桂竹香外膜蛋白基因转移到桑树体内的制备方法，其特征在于构建受体系统选用桑树幼期叶片，转化前，对幼叶进行测定，选择浸染的农杆菌。

5.根据权利要求1所述的一种桂竹香外膜蛋白基因转移到桑树体内的制备方法，其特征在于目的基因的转化采用光密度测定法来确定农杆菌浓度，挑取单菌落接种在液体培养基内进行液体振荡培养12-24小时，离心4000r/min后加入植物外植体诱导愈伤组织的液体培养基，外植体在转化前培养时间为2天；切割成小块浸泡在菌液中浸泡5-8分钟，再将其培养在诱导愈伤组织的固体培养基上，与农杆菌共培养4-6天；然后继代脱菌培养5-6次。

6.根据权利要求1所述的一种桂竹香外膜蛋白基因转移到桑树体内的制备方法，其特征在于外源基因整合的步骤是：

A.筛选转化细胞；

B.转化植株；

C.进行性状鉴定及外源基因表达调控；

D.进行遗传学分析，并获得转基因植物品种；

7.根据权利要求6所述的一种桂竹香外膜蛋白基因转移到桑树体内的制备方法，其特征在于外源基因表达：

A.Southern杂交，Southern杂交是用标记的外源基因作探针，与植物细胞DNA进行杂交；

B.通过Northern杂交证明外源基因在植物细胞内正常转录，生成mRNA；

C.通过Western杂交证明外源基因在植物细胞内转录及翻译成功，生成蛋白质。