[发明专利]蛋白粉生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及蛋白粉的生产方法以及含有此蛋白粉的缓释制剂。此外，本发明涉及含有特定基料等的缓释制剂。

背景技术

近来，由于基因工程和细胞技术的发展，人们已利用大肠埃希氏杆菌(Escherichia coli)、酵母、动物细胞或诸如山羊、仓鼠等的活体大量生产蛋白质，并且应用于药物用途。然而，由于这些蛋白质对酸性条件和肽酶具有非常高的反应活性，它们不能通过口服给药吸收。因而它们通常通过皮下或肌内给药。然而，由于它们的生物半衰期通常较短，因而必须频繁给药。频繁注射会给患者带来明显的身体负担。

例如，生长激素(下面有时称作GH)，一种原产于和分泌于脑垂体前部中的代表性激素，它是一种具有广泛不同生理学活性的蛋白质，例如促进身体生长、葡萄糖和脂质代谢、蛋白质合成代谢以及细胞增生和分化。并且GH近来已在基因重组技术领域中通过利用大肠埃希氏杆菌大规模生产，并且临床和世界范围地应用于药物用途。然而，由于生物半衰期较短，为维持有效的血液含量就必须频繁施用GH。特别是，在垂体性侏儒的病例中，需要用几个月至10年的时间对婴儿或少年患者进行长期的每日皮下给药。

为解决蛋白质药剂的这种特殊问题，人们研究了各种药物传递系统。此系统的一个实例是可在一段长的时间内持续释放蛋白质的缓释制剂。JI-A8-217691(WO 96/07399)公开了一种缓释制剂的生产方法，其中所说的缓释制剂中含有通过使用水溶性肽型生理学活性物和氧化锌等与生物降解性聚合物的水溶液制备的水不溶性或水微溶性多价金属盐。此外，JP-A 8-503950(WO 94/12158)公开了一种多孔性颗粒状微胶囊的生产方法，作为缓释制剂的生产方法，其中所说的缓释制剂中含有人GH(下面有时称作hGH)和生物降解性聚合物，此方法是通过将hGH和聚合物的有机溶剂溶液喷雾到液体氮中，这种多孔性颗粒中保留有生物学活性。另外，JP-A 10-504017(WO 95/29664)公开了一种缓释微胶囊的生产方法，通过将固体碳酸锌等分散在聚合物溶液中，然后加入生理学活性物质(激素等)，以便使生理学活性物质和金属阳离子分开式地分散在生物降解性聚合物中。尽管JP-A(WO 98/27980)和JP-A 10-7538(WO 97/01331)公开了含生理学活性多肽的缓释制剂的生产方法，但没有公开将生理学活性多肽冻干的条件。

由此可见，为构建能够保留蛋白质生理学活性的药物传递系统，人们作了很多尝试。然而，针对蛋白质的具有较高有序结构的特殊问题，可能存在涉及蛋白质稳定性的问题，这些问题起因于在制剂生产步骤过程中的变性、制剂中蛋白质随时间而变化导致的变性和/或给药后的体内变性等。具体说，缓释制剂可能具有诸如蛋白质摄入到制剂中的效率较低、给药初期阶段药物的过量释放、难以控制药物长时间的释放、制剂给药后药物的血液含量低等的问题仍未解决。

然而，当以细分粉末的形式制备蛋白质时，预期由于分子迁移性下降可以进一步构建蛋白质的稳定性。

JP-A 4-500527(WO 90/13285)公开了一种细分蛋白粉的生产方法，通过将蛋白水溶液喷雾到液化气中，以便使溶液冷冻，然后干燥。

此外，《药学杂志》(Journal of pharmaceutical Science)Vol.87，p152(1998)中报道了一种通过喷雾干燥生产细分蛋白粉的方法。然而，此报道公开了变性程度会增加，其与喷雾形成的蛋白水溶液颗粒的粒度成相反的有关，并且应当添加大量表面活性剂来控制之。

另外，WO 99/48519(其在本申请优先权日之后公开)公开了一种生理学活性多肽粉的生产方法，通过将水溶混性有机溶剂和/或挥发性盐添加到生理学活性多肽水溶液中并且将溶液冻干。

此外，JP-A 9-248177公开一种干燥微生物细胞的生产方法，通过将微生物细胞培养物液滴滴落到冷却至冰点以下的金属板上，以便将细胞快速冷冻。

通常来说，冻干的冷却速率慢于-10℃/min。例如，Iyakuhin noToketsukanso(药物冻干)(Yoji OHOHASHI，制备和机器，第8页，1988年1月15日，Crest有限公司出版)描述如下。“在用普通小瓶冻干时，进行快速冷冻处理，或者使用含高浓度糖类的溶液，以致于它可以形成玻璃态，这种玻璃态不会经常遇到除非使用特定的装置。即，冷却速率为0.3至5.0℃/min。”另一方面，在将水溶液喷雾到液化气如液化氮等中的情形中，冷却速率极快，如在液化氮中时快于-300℃/min。