[发明专利]治疗方法和药物筛选方法

说明书

本发明涉及治疗方法和药物筛选方法，具体地，本发明涉及心血管药物的设计和治疗用的化合物。

在正常发育和身体健康中脂质代谢动态平衡受到严格的调控，然而，一旦脂肪代谢发生紊乱就会导致动脉粥样硬化、肥胖症、糖尿病和癌症等许多疾病。脂肪动态平衡中的关键调节物包括脂肪转录识别因子家族，已知的有过氧化物酶体增生激活受体(PPARs)。PPARs属于类固醇激素/核受体亚家族的成员，它可以被结构多样的化学物质如脂肪酸、前列腺素、低脂血症药物、非类固醇抗炎症药物、胰岛素感光剂和环境污染物激活(1，2)。PPARα是最早被描述的PPAR类物质，它能调节肝脏的脂质代谢，可以被降脂类药物如降固醇酸激活(3，4)。如果小鼠体内编码PPARα的基因断裂的话，PPARα就不能对低脂血症药物(4)作出反应发变形并分泌肝脂，肝细胞中就会积累大量的脂质小滴。在脂质激活脂肪细胞发育过程中需要另外一种PPARγ。PPARγ是对前列腺素具有高度亲合力的核受体(5)，同时也是噻唑类抗糖尿病剂例如rosiglitazone(BRL49653)(国际公布号为WO94/05659)(6)的药理性靶，该基因的遗传切除是致死的(7)。

另一种形式PPAR的PPARδ的功能还未知。有报道称PPARδ在所有检测的组织中以极低水平表达(8)，然而在单核细胞/巨噬细胞系的细胞中，我们观察到PPARδ是选择性表达的，当佛波醇脂诱导巨噬细胞分化时，和PPARγ一样，PPARδ也是进行增量调节。PPARδ是脂肪酸感应器，可以被作为单核细胞分化中重要信号化合物的脂肪酸激活，如亚油酸和油酸类不饱和脂肪酸。纤维化药物如安妥明、thiazolidinediones如BRL49653等不能激活PPARδ。

WO9728149(Merck & Co.Inc)描述了PPARδ激动剂有利于提高哺乳动物体内高密度脂蛋白(HDL)的血浆水平，可以防止、中断或减慢粥样硬化心血管疾病的进程。

已知高脂肪食物是导致粥样硬化的主要因素，许多用于治疗该病的药物均是为了调节脂质代谢。巨噬细胞充满脂质小滴后被高度活化，其分化成的泡沫细胞中脂质与粥样硬化的病理学密切相关。血管病变时高密度存在的泡沫细胞形成斑块，最终斑块裂解导致血管血栓堵塞。这种堵塞临床上表现为心脏病发作、中风、外周血管疾病。我们现已证明由佛波醇脂激活的小鼠巨噬细胞和人类的THP-1型单核细胞系可以表达PPARδ。活化的THP-1细胞发生粘连，散布于培养皿中。在合适的脂肪酸条件下，当用Oil Red O染色法检测时，会发现这些细胞充满了脂质，并形成了泡沫细胞。这些细胞表达与体内泡沫细胞相关的基因，如IL-1β、TNFα、IGF-1、CD36、MCP-1和血栓合成酶基因。这些细胞提供了一种脂质诱导泡沫细胞形成的模型。候选抗硬化药物如BRL49653可以防止这种积累，因此证明了药物的一种抗动脉硬化特性，这种模型可用于鉴定抗粥样硬化的药物。这种方法可以在标准的微量滴定盘上进行，且脂质染色通过在微量滴定盘阅读器进行目测。

我们采用一个可选择的表达载体修饰的THP-1型细胞表达PPARδ反义RNA。这种细胞系在培养物上能正常地生长，然而用佛波醇酯处理的细胞系不能再进行分化。佛波醇酯处理后，细胞系再经锥虫蓝染色，结果表明这些细胞已经死亡。因此，PPARδ功能的抑制切断细胞对炎症刺激物从分化到死亡的应答。粥样硬化斑块中充满了来源于高度活化巨噬细胞的泡沫细胞，并且含有高浓度的炎症介质。不被其它的理论所束缚，我们认为泡沫细胞中PPARδ功能的抑制如动脉粥样损坏，将有利于在斑块中造成一连串的自我破坏。最近，采用反义治疗抗BCL-X(Pollman，1998，Nature Medicine 4，222-227)来调节无炎症或坏疽的去除泡沫细胞已经作为改善斑块衰退的一种有效手段。我们认为活化巨噬细胞中PPARδ的靶象是高度特异性的，因为这种反应依赖于活化泡沫细胞的特定表型形态。

本发明的一个目的是提供或筛选出一种化合物，该化合物能扰乱泡沫细胞发育形成或导致潜在泡沫细胞的去除。这种化合物能利于斑块的衰退，因而减少了心脏病、中风或血栓症发生的危险。

我们已经证实PPARδ在巨噬细胞活化中起了关键作用，而且有选择地抑制PPARδ的活性能防止泡沫细胞的形成。

我们也证实了PPARγ兴奋剂抑制了脂质积累，PPARδ和PPARγ在泡沫细胞形成中是相互对立的。