[发明专利]适于检测德克氏酵母属和酒香酵母属的培养基

说明书

发明目的

本发明涉及到一种培养基，在其制剂中含有乙醇和p-香豆酸，它适于食品和饮料污染物德克氏酵母属和酒香酵母属酵母的鉴别检测和计数。采用所述的适于德克氏酵母属和酒香酵母属酵母鉴别检测的方法也是本发明的目的。所述培养基在酵母鉴定法(gallery)中的用途还是本发明的一项目的。

本发明的目的在于提供食品和饮料工业一种培养基和使用所述培养基的方法，通过这种培养基和其中生长的菌落的颜色变化，以及特征的酚样香味的产生，能够分离、鉴别地检测和计数德克氏酵母属和酒香酵母属酵母。

背景技术

目前在许多不同的聚集处(例如，饮料、食品、自然底物)的酵母微生物区系的研究和鉴定一般包括首先菌株分离阶段和在普通酵母培养基的纯化阶段，接着是其次的鉴定阶段，它采用经典的分类学方法或分子生物学基础的技术。德克氏酵母属和酒香酵母属酵母的缓慢生长令其在常规使用的培养基中的分离极其困难，由于这些酵母已经被与它们共存的更快生长的酵母掩盖(overtake)。这样的事实令它们的检测和计数，以及它们以后在食品和饮料中的鉴定更困难，这种鉴定一般通过采用极慢的、工作深入的和专业技能要求高的经典技术或者通过采用包括昂贵的反应物、在市场上并不经常迅速获得的分子探针或引物和熟练操作者的分子生物学技术完成。

毫无疑问地确信这些酵母包含于酒-″horse sweat″-尤其是在栎树桶陈化的那些之中的严重感觉缺陷的产品内是可能的。(Chatonnet等人，1992，J.Sc.Food Agric.，60.165-178)。其后，它们在酒中的检测和计数是必需的，随之出现发展适于那样的检测和计数的快速方法的需要。本领域参考书目公开了适于德克氏酵母属和酒香酵母属酵母检测和计数的方法，它基于这些种的放线菌酮耐药性和它们的酸化能力(Chatonnet等人，1992，J.Sc.Food Agric.，60，165-178；Fugelsang，K.等人，1993.Ed.Barry H.Gump.ACS Symposium series 536.American ChemicalSociety，华盛顿.Cap.7，110-119；Alguacil，M.等人，1998.Aliment.Equipos Tecnol，10，81-85).然而，这些已公开的培养基并不完全令人满意，由于它们没有充分的防止快速生长菌种生长的选择性，而且不是完全鉴别的。

因此，对于适于德克氏酵母属和酒香酵母属酵母的简易和快速鉴定的培养基和方法存在真正的和实际的需要，即提供食品和饮料工业一种适于德克氏酵母属和酒香酵母属酵母的快速分离、鉴别的检测和计数方法。

发明介绍

令人惊奇地发现采用含有乙醇和p-香豆酸的培养基适于德克氏酵母属和酒香酵母属酵母生长，与其它酵母相比，在培养5至12天之后，这些酵母以特征的和唯一形式产生4-乙苯酚和乙酸。此外，通常与德克氏酵母属和酒香酵母属酵母共存、更快生长从而防碍它们的检测的其它种的酵母，被选择性地抑制。

按照本发明，研发一种培养基，它对于德克氏酵母属和酒香酵母属酵母是部分选择性地和完全鉴别的，它基于通过其特征性香味的4-乙苯酚检测，和借助于适当的酸-碱颜色变化的醋酸检测，乙苯酚和醋酸由在含乙醇和p-香豆酸的培养基中生长的那些酵母产生。

因此，本发明涉及到适于食品和饮料污染物德克氏酵母属和酒香酵母属酵母的鉴别检测和计数的培养基。所述的培养基包括营养基，作为非发酵能源和抑制其它酵母种的乙醇，作为由所述酵母种产生的芳香化合物促进底物的p-香豆酸，变色点位于酸性范围的酸-碱指示剂(特别是溴甲酚绿)，抑制几个种酵母生长的抗生素(特别是放线菌酮)，以及琼脂，当这种培养基以固体形式使用时。

在一项实施方案中，按照本发明的培养基中营养基是″YeastNitrogen Base″(酵母氮基)并且酸-碱指示剂是溴甲酚绿。

在另一项实施方案中，按照本发明的培养基进一步含有细菌生长抑制剂，特别是氯霉素和/或土霉素，它对于包括种群的混合细菌之内德克氏酵母属和酒香酵母属酵母的检测是特别地有效的。

本发明目的培养基，当其为液体形式时，通过灭菌过滤制备，接着分散至足够的试管中。预计培养基是固体形式时，琼脂溶于软化水中，接着在高压灭菌器中灭菌；灭菌之后冷却至大约50℃，无菌条件下加入以前已经滤过灭菌过的其它的成分。在灭菌之前对两种培养基进行pH调节，pH值取决于使用的酸-碱指示剂。匀化混合物，并倾入陪替氏培养皿，固化之后培养基备用。